徐立群
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 2014年
- 根据GenBank上查到的人胶原蛋白序列COL6A2(NM058175.2),利用Primer 5设计特异性引物,以吉林农业大学生物物理实验室构建的重组质粒pCMV-Sport6-COL6A2为模板进行目的基因的克隆,获得目的基因COL6A2,然后用双酶切的方法连接目的基因COL6A2和表达载体pET32a,将连接产物转化到大肠杆菌中构建原核表达载体pET32a-COL6A2。再将鉴定成功的重组质粒pET32a-COL6A2分别转化到大肠杆菌BL21、BL21(DE3)、BL21(BE3)plysS及Rosetta(DE3)中,采用1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,经12%SDS-PAGE电泳分析并筛选出重组蛋白表达量最高的菌株。利用Ni Sepharose 6 FastFlow琼脂糖树脂亲和层析柱纯化重组蛋白。结果表明:获得了大小为570 bp的COL6A2片段,经测序鉴定序列正确;成功构建了pET32a-COL6A2原核表达载体并表达出约30 kD的目的蛋白;筛选出BL21(DE3)作为高效表达菌株,其重组蛋白表达量占菌体总蛋白的23.9%;经镍离子亲和层析纯化获得了纯度>90%的目的蛋白。
- 王皓徐立群陈欢孙旸王刚陈光
- 关键词：胶原蛋白大肠杆菌克隆纯化
- 类人胶原蛋白真核表达载体的构建及在毕赤酵母中的分泌表达
- 胶原蛋白是结缔组织中极其重要的结构蛋白质,对维护细胞、组织及器官的正常生理功能有着重要作用。胶原蛋白被广泛的应用于医学材料及药物方面、美容化妆品、保健品以及各种实用工业中。目前胶原蛋白家族大约有28个成员。其中,Ⅵ型胶原...
- 徐立群
- 关键词：胶原蛋白PPIC9K毕赤酵母
- 文献传递
- Ⅵ型类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2013年
- 用PCR方法以Ⅵ型胶原蛋白基因组DNA为模板,获得Ⅵ型胶原蛋白α2链基因,并将该基因插入到表达载体pPIC9K,对重组质粒pPIC9K-COL6A2所含的目的片段进行双向测序。将测序正确的重组质粒用限制性内切酶SalⅠ线性化,经电击转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中。通过MM/MD法进行甲醇利用表型的筛选,PCR鉴定目的基因的整合及G418梯度筛选高拷贝转化菌。在酵母α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下,目的蛋白分泌表达到胞外。1%甲醇诱导72h的发酵液,经SDS-PAGE电泳鉴定该重组蛋白分子质量约为32kD。
- 徐立群王皓孙旸王刚陈欢陈光
- 关键词：胶原蛋白PPIC9K毕赤酵母
