陈蔚
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在家蚕中表达瘦素基因
- (leptin)是肥胖基因编码、由脂肪组织分泌的多肽类激素，具有抑制摄食、调节脂肪沉积与能量代谢的功能。本实验利用bac-to-bac昆虫杆状病毒表达系统，将体外克隆的瘦素基因在家蚕体内表达，以获得融合的瘦素蛋白。
- 陈蔚付凡唐顺明汪生鹏黄金山赵巧玲沈兴家
- 关键词：家蚕瘦素基因
- 人生长素HGH基因在Bac-to-Bac/BmNPV家蚕杆状病毒表达系统中快速表达
- 长激素(Human growth Hormone，HGH)是由腺垂体分泌的一种在机体生长、发育及代谢中发挥重要作用的激素，具有广泛的生理功能。本实验采用Bac—to-Bac／BmNPV家蚕杆状病毒表达系统，以家蚕为宿主表...
- 付凡陈蔚唐顺明汪生鹏黄金山赵巧玲沈兴家
- 关键词：家蚕
- 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在家蚕中表达人生长素被引量：2
- 2011年
- 人生长素是由腺垂体分泌的一种在人体生长、发育及代谢中发挥重要作用的激素,具有广泛的生理作用。利用家蚕核型多角体病毒(BmNPV)Bac-to-Bac表达系统,将人生长素基因(hgh)克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,通过细菌转座子原理,转化BmDH10Bac细胞,获得重组穿梭载体质粒Bacmid-hgh,并将其转染家蚕BmN细胞,获得含有hgh的重组杆状病毒。将此重组病毒感染家蚕BmN细胞,收集重组病毒液并穿刺接种家蚕5龄起蚕,3 d后观察到家蚕感染了杆状病毒的症状,并通过SDS-PAGE和Western blotting方法在家蚕血液中检测到分子质量约20 kD的目的蛋白,表明人生长素通过Bac-to-Bac系统在家蚕体内获得了表达。
- 付凡陈蔚唐顺明汪生鹏黄金山赵巧玲沈兴家
- 关键词：家蚕核型多角体病毒家蚕
- 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在家蚕中表达人瘦素蛋白被引量：2
- 2011年
- 瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因编码,对人体能量代谢等多种生理过程起着重要的调节作用。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人瘦素蛋白基因(lep)克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,并转化E.coli DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-lep,然后转染家蚕BmN细胞,获得重组杆状病毒。用SDS-PAGE和Western blotting方法在感染重组病毒的家蚕BmN细胞检测到大小约22 kD的蛋白条带,与预期的人瘦素蛋白分子质量相符。给家蚕5龄起蚕注射重组病毒液后的4～5 d出现发病症状,RT-PCR检测发病家蚕的血液中有lep基因转录,并通过SDS-PAGE和Western blotting检测到大小为22 kD的人瘦素蛋白的表达。研究结果表明,利用Bac-to-Bac表达系统能够获得含有人瘦素蛋白基因的重组杆状病毒,并且目的蛋白能在家蚕细胞及幼虫体内表达。
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- 关键词：重组杆状病毒融合蛋白家蚕
- 利用生物信息学方法预测家蚕核型多角体病毒基因组编码的miRNA被引量：4
- 2011年
- microRNAs(miRNAs)是长度为18～25 nt的非蛋白质编码小RNA分子,可以通过抑制有关基因mRNA的翻译从而调控机体的生长发育、疾病发生等过程。在很多病毒中发现有miRNA的存在,这些miRNA可能在病毒基因的表达以及与宿主的相互作用中发挥作用。利用vMir软件预测家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组可能编码的miRNA前体序列,对BmNPV基因组扫描分析后,得到7条能形成发夹结构的可能是miRNA的候选前体序列。以BmNPV添食感染5龄起蚕,72 h后取幼虫血淋巴提取总RNA,对这7条序列进行反转录PCR验证,其中扩增出的5条序列在BmNPV基因组中有相同的序列,推测这5条序列为BmNPV基因组编码的miRNA前体序列。进一步分析5条miRNA前体序列的发夹结构,并用反转录PCR的方法验证其成熟体序列,结果在5条miRNA前体序列共扩增出6条在BmNPV基因组中有相同序列的成熟体序列,它们分别位于不同的ORF之间,是BmNPV基因组编码的miRNA。利用在线靶基因预测程序RNAhybrid和RNA22预测到6条miRNA在BmNPV中的13个可能的靶基因,其中有6个靶基因是病毒的结构蛋白基因,2个为晚期表达因子基因,5个为未知功能基因。推测这些BmNPV基因组编码的miRNA可能与病毒感染宿主有关。
- 陈蔚黄勇赵巧玲宋菲裘智勇夏定国沈兴家
- 关键词：家蚕核型多角体病毒小RNA生物信息学反转录PCR靶基因
- 家蚕核型多角体病毒编码的miRNA及其功能初步研究
- MicroRNAs/(miRNAs/)是长度为21-25nt非蛋白质编码的小RNAs,它可以调节有关的基因的表达,从而调控生物体的生长、发育和新陈代谢等过程。miRNAs最初在Caenorhabits elegan线虫中...
- 陈蔚
- 关键词：MIRNA高通量测序靶基因
- 文献传递
