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王斌

作品数：1 被引量：1H指数：1
供职机构：山东省医学科学院更多>>
发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学

主题

  • 1篇炎性
  • 1篇炎性因子
  • 1篇原核表达
  • 1篇原核表达载体
  • 1篇上皮
  • 1篇上皮细胞
  • 1篇细胞
  • 1篇绿脓杆菌
  • 1篇活性鉴定
  • 1篇角膜
  • 1篇角膜上皮
  • 1篇角膜上皮细胞
  • 1篇杆菌
  • 1篇鞭毛
  • 1篇鞭毛蛋白

机构

  • 1篇济南大学
  • 1篇山东省医学科...

作者

  • 1篇林丹丹
  • 1篇王宜强
  • 1篇王斌
  • 1篇赵格

传媒

  • 1篇中华微生物学...

年份

  • 1篇2013
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE的重组表达及初步活性鉴定被引量：1
2013年
目的原核表达及纯化绿脓杆菌鞭毛蛋白ngE并进行初步活性鉴定。方法分析绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE的基因序列，设计带适当酶切位点的引物，用PCR方法扩增出FlgE的编码DNA序列，与大肠杆菌表达载体pET24a同时经NdeI／Hind Ⅲ双酶切、纯化及连接后构建pET24a—FlgE原核表达质粒，挑选重组阳性质粒经DNA测序确认序列正确，转化至大肠杆菌B121中进行诱导表达条件优化，使重组质粒表达目的蛋白，采用组氨酸标签亲和层析法对目的蛋白进行纯化，通过SDS-PAGE对纯化后蛋白相对分子质量进行鉴定，用试剂盒进行去内毒素化处理。在体外培养人角膜上皮细胞系细胞，加入纯化的F1gE重组蛋白，培养4h后应用实时定量PCR检测各种相关的炎性因子以反映FlgE蛋白活性。结果可用于大肠杆菌表达系统的重组pET24a—F1gE构建成功，其编码的蛋白在BL21中获得高效表达，当诱导剂异丙基一B—D一硫代吡喃半乳糖苷浓度为1mmol／L，在16、225r／min振荡培养20h，诱导目的蛋白表达量最高，经纯化、去内毒素处理和SDS—PAGE鉴定，获得纯化的重组FlgE蛋白。角膜上皮细胞用20μg／ml FlgE处理后，细胞内炎性相关分子IL-6和IL-8的表达量明显上升，而灭活的F1gE蛋白则丧失该刺激活性。结论获得纯化的重组绿脓杆菌鞭毛蛋白FlgE，且可刺激角膜上皮细胞上调炎性因子IL-6、IL-8的表达。
林丹丹赵格王斌王宜强
关键词：绿脓杆菌原核表达载体角膜上皮细胞炎性因子
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