汤雄文
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ErbB-4受体介导卵巢癌细胞增殖、侵袭等生物学行为的实验研究
- 2009年
- 探讨ErbB-4受体在卵巢癌细胞增殖、侵袭等生物学行为中的作用。免疫组化检测ErbB-4受体在卵巢癌细胞株OVCAR-3表达;噻唑蓝比色法（MTT）测定不同浓度的ErbB-4单克隆抗体（Ab-3）对体外培养的卵巢癌OVCAR-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;侵袭实验观察Ab-3对OVCAR-3侵袭能力的影响。结果表明,ErbB-4在OVCAR-3细胞株中呈阳性表达;不同浓度（0.625-10μg/ml）的Ab-3均能抑制OVCAR-3细胞生长,且具有浓度和时间依赖性,其作用72 h的中效浓度为4.48μg/ml。流式细胞仪检测发现Ab-3（2.0μg/ml）作用24、48及72 h后,OVCAR-3细胞出现S期阻滞,肿瘤细胞的凋亡率逐渐增加;抗体处理组穿透侵袭小室滤膜的细胞数（78.0±6.1）明显少于对照组（132.0±17.2）（P〈0.01）。因此,Ab-3可抑制内源性ErbB-4表达的OVCAR-3细胞株的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡。
- 汤雄文杨竹朱元方樊萍王露颖
- 关键词：卵巢癌增殖
- 超声辐照载Fcy：：Fur自杀基因微泡治疗卵巢癌移植瘤的实验研究被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨超声定位辐照载Fcy::Fur自杀基因微泡对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的抑瘤效应。方法:将荷瘤鼠随机分成5组,超声辐照载基因微泡组、超声辐照基因组、超声辐照微泡组、载基因微泡组和对照组。处理后剖取瘤块测体积、重量,计算抑瘤率;TUNEL检测肿瘤细胞凋亡。结果:各组肿瘤体积、重量、抑瘤率及凋亡均不同,超声辐照载基因微泡组的肿瘤体积、重量最小,抑瘤率最大,凋亡率最高,与其他组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:载自杀基因微泡在超声定位辐照下,抑瘤效果好,有望成为卵巢癌新的治疗模式。
- 朱元方张丽平汤雄文胡丽娜李攀杨环
- 关键词：自杀基因卵巢癌靶向
- Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶真核表达载体的构建及其表达鉴定被引量：2
- 2009年
- 为构建单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV1TK)的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK,鉴定其在真核细胞中的表达和功能。以pORF-HSV1TK为模板,PCR扩增的目的基因HSV1TK片段与pMD18-T载体相连接构建重组克隆pMD18-T/HSV1TK。再双酶切出HSV1TK片段,插入pcDNA3.1-EGFP多克隆位点,构建pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK真核表达载体并进行酶切、测序鉴定[1]。分别用荧光显微镜观察和RT-PCR方法检测脂质体介导pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK在卵巢癌细胞SKOV3的表达;分别用MTT法和光镜检测胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV1TK/GCV)系统对SKOV3体外杀伤作用及旁观者效应。结果表明,重组载体酶切鉴定结果与预期结果一致,基因序列与GenBank上报道的HSV1TK基因序列完全一致。荧光显微镜观察转染后的细胞发出绿色荧光;RT-PCR结果表明HSV1TK基因能在SKOV3内有效表达。MTT和光镜结果显示转染HSV1TK基因的SKOV3细胞,加入前体药物丙氧鸟苷(GCV)处理后对其有明显的杀伤作用和旁观者效应。成功构建的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP/HSV1TK能在SKOV3细胞中稳定表达,且HSV1TK对卵巢癌细胞株SKOV3体外有强大的杀伤作用和旁观者效应。
- 樊萍杨竹胡接力崔静汤雄文王露颖甘胜伟
- 关键词：自杀基因真核表达载体旁观者效应卵巢癌
- ErbB4受体介导卵巢癌细胞增殖、侵袭等生物学行为的实验研究
- 目的：卵巢癌死亡率居女性生殖系统恶性肿瘤之首。近年对其诊治虽取得了一些进展，但是远期生存率，尤其是晚期患者的生存率仍没有明显提高。因此寻找化疗、手术以及放疗之外新的治疗方法显得尤为重要。近年来，以肿瘤细胞的特性改变为作用...
- 汤雄文
- 关键词：卵巢癌细胞增殖分子治疗
- 文献传递
- 含hTERT启动子和Fcy::Fur基因重组质粒的构建及其对卵巢癌细胞的体外杀伤作用被引量：1
- 2009年
- 目的构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子和融合型自杀基因Fcy::Fur的重组真核表达质粒并探讨它对卵巢癌细胞的体外杀伤作用。方法①从pORF5-Fcy::Fur质粒中PCR扩增Fcy::Fur片段,亚克隆进p2XEB质粒,构建含hTERT启动子和Fcy::Fur基因的重组真核表达质粒p2XEB-Fcy::Fur;同理,将Fcy::Fur亚克隆进pGL3-Promoter质粒,构建含猿猴病毒40(SV40)启动子和Fcy::Fur基因的重组质粒pGL3-Pro-Fcy::Fur,重组子经酶切鉴定、测序;②RT-PCR检测卵巢癌细胞SKOV3和人胚肺成纤维细胞MRC-5中hTERTmRNA的表达,荧光素酶活性分析检测hTERT启动子在2种细胞中活性;③用超声微泡作载体,将上述2种质粒分别转染SKOV3和MRC-5,与前药5-氟胞嘧啶(5-FC)共培养后,CCK-8测定转染细胞增殖抑制率;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;RT-PCR检测Fcy::FurmRNA的表达。结果p2XEB-Fcy::Fur和pGL3-Pro-Fcy::Fur2种重组质粒酶切和测序结果与预期完全相符,hTERT启动子和Fcy::Fur片段测序与GenBank报道一致,且插入方向正确;SKOV3和MRC-5中hTERTmRNA表达分别为阳性和阴性,hTERT启动子在SKOV3中活性为26.2%,在MRC-5中为0.65%;p2XEB-Fcy::Fur/5-FC系统对SKOV3的增殖抑制率明显高于MRC-5(P=0.036),而pGL3-Pro-Fcy::Fur/5-FC系统对2种细胞的增殖抑制率无明显区别(P=0.87);转染pGL3-Pro-Fcy::Fur的SKOV3、MRC-5细胞以及转染p2XEB-Fcy::Fur的SKOV3细胞,均见大量凋亡细胞和Fcy::FurmRNA表达,而转染p2XEB-Fcy::Fur的MRC-5少见凋亡细胞,也无Fcy::FurmRNA表达,与前三者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论含人端粒酶逆转录酶启动子和Fcy::Fur基因的重组质粒p2XEB-Fcy::Fur成功构建,p2XEB-Fcy::Fur/5-FC系统能靶向杀伤端粒酶逆转录酶阳性的卵巢癌细胞。
- 朱元方李攀康楷胡丽娜乐爱文汤雄文杨环
- 关键词：人端粒酶催化亚单位启动子自杀基因卵巢癌
