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产蛋下降综合征病毒纤突蛋白Knob-S区原核表达及其活性分析被引量：6: 2012年; 通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫鸡制备抗血清,通过血凝试验、Western blot和血凝抑制试验分析,表明该融合蛋白不能凝集鸡红细胞,无血凝活性;但可与EDSV阳性血清发生特异反应,并诱导机体产生特异性抗体,具有很好的抗原性。; 陈滔唐应华陆吉虎高峰于漾何家惠黎满香侯继波; 关键词：原核表达

湖南猪源粪肠球菌的分离鉴定及16S rDNA系统进化分析被引量：5: 2011年; 从湖南各地送检至实验室的临床样本中分离到42株革兰氏染色阳性及过氧化氢酶阴性的球菌,其中78.6%来自于肺脏,菌落形态及染色镜检均与粪肠球菌参考株ATCC 29212相似,兰氏分群鉴定97.6%(41/42)为D群,生化特性符合粪肠球菌特征。16SrDNA测序鉴定显示:42个分离株与同步测序的ATCC 29212同源性在99.2%到100%之间,与所选择粪肠球菌参考序列的同源性在98.7%到100%之间,NCBI在线BLAST分析发现42株均与GeneBank收录的粪肠球菌序列同源性最高。湖南分离株16SrDNA序列与E.faecalis参考序列进化关系与地域分布无关,来源于不同宿主的菌株的16SrDNA变异并不大,而与E.faecium、E.canis、E.avium、E.hirae等4种肠球菌则有多处变异,这些变异区域在这4种肠球菌中却是保守的。; 黎满香林荣高薛立群蒋伟陈滔; 关键词：粪肠球菌 RDNA

粪肠球菌PCR检测方法的建立被引量：10: 2010年; 为建立一种基于细菌16 S rDNA的粪肠球菌PCR检测方法,用于检测临床样本和鉴定分离纯化的细菌,通过比较肠球菌间16 S rDNA的差异,设计了1对特异性引物,并对PCR反应条件进行了优化,对PCR的特异性和敏感性进行了检测。结果显示,粪肠球菌ATCC29212及42个鉴定阳性的临床分离株为PCR阳性,检测结果与16 S rDNA测序的鉴定结果一致,其他种属的4株菌为PCR阴性,所得扩增条带单一且与预期的产物大小一致,测序表明该条带为目的条带;该方法的最小检出量为134 CFU,并能直接对病料进行检测。表明所建立的PCR方法能特异地检测粪肠球菌,且敏感、简易、快捷,适用于实验室的日常检测。; 黎满香林荣高薛立群蒋伟陈滔; 关键词：粪肠球菌聚合酶链反应

含禽流感病毒M2e氨基端抗原表位的重组传染性法氏囊病毒VP2蛋白的免疫原性鉴定被引量：2: 2012年; 【目的】构建传染性法氏囊病毒VP2蛋白展示禽流感M2e抗原表位的重组蛋白,研发预防H5或H9亚型禽流感和传染性法氏囊的基因工程疫苗。【方法】根据现有禽流感疫苗株M2e的氨基端12个氨基酸多肽序列(nM2e)序列,结合GenBank中H5和H9亚型禽流感病毒nM2e的比对结果,确定nM2e序列。用融合PCR分别将1拷贝H5或H9的nM2e序列插入IBD B87株VP2基因的PBC区,获得VP2BCnM2e重组基因。将重组基因克隆至杆状病毒表达系统,转染Sf9细胞进行表达。经间接免疫荧光和Western blotting检测Sf9细胞表达重组基因后,扩繁重组病毒,制备疫苗,间隔4周对非免鸡作2次重复免疫,用间接ELISA和鸡胚成纤维细胞中的病毒血清中和试验检测血清中VP2和nM2e的抗体效价。【结果】成功构建含H5或H9 nM2e的VP2BCnM2e重组基因,该重组基因在Sf9细胞中得到表达。经免疫鸡,两重组蛋白均能激发针对VP2和nM2e的抗体,VP2BCnM2eH5组抗体效价高于VP2BCnM2eH9组。【结论】两重组蛋白均具有免疫原性,VP2BCnM2eH5免疫原性更佳。; 唐应华宫玉珍王永伟陆吉虎吴培培高峰陈滔何家惠侯继波; 关键词：禽流感病毒传染性法氏囊病毒 VP2

猪链球菌2型湖南分离株4种毒力基因的序列分析被引量：3: 2011年; 本试验对猪链球菌2型湖南分离株的cps2j、mrp、epf、sly四种毒力基因进行部分序列扩增、测序后分析,结果表明,4株2型猪链球菌均可检出这四种毒力基因,其中cps2j、epf、sly三基因与国内外报道其他分离株具有很高同源性(98%以上)。然而湖南分离株Hunan-An1、Hunan-An2、Hunan-Ping的mrp基因与其他对比菌株相比同源性低,进化关系远,有较大变异。; 黎满香林荣高颜运秋卿泰安卢帅蒋伟陈滔; 关键词：猪链球菌2型毒力因子

猪链球菌分子生物学分型方法研究进展被引量：4: 2010年; 猪链球菌是猪重要的致病菌,其种类繁多,鉴定困难。传统分型方法包括兰氏分群法,荚膜抗原分型,溶血性分型及生化分型法等。分子生物学技术的发展给猪链球菌的分型带来新的思路。论文对猪链球菌分子生物学分型方法进行介绍,包括多位点序列分型技术、脉冲场凝胶电泳、扩增片段长度多态性、随机扩增的多态性DNA、限制性片段长度多态性、核糖体分型,PCR-限制性片段长度多态性和测序。; 林荣高黎满香蒋伟陈滔; 关键词：猪链球菌分子生物学

减蛋下降综合征病毒重组Knob-S基因在杆状病毒系统中的表达及其免疫原性鉴定被引量：2: 2015年; 为以杆状病毒系统在Sf9细胞中表达含减蛋下降综合征病毒(EDSV)重组Knob-S蛋白质来制备亚单位疫苗,采用PCR方法从鸭胚繁殖的EDSV尿囊液中扩增Knob-S基因,并克隆到p Fast Bac1中,经转化DH10Bac获得重组r Bac-Knob-S。将r Bac-Knob-S转染Sf9细胞获得重组杆状病毒,利用重组杆状病毒感染Sf9细胞表达重组蛋白质。重组Knob-S蛋白质经Western blotting和间接免疫荧光试验鉴定均为阳性。将重组Knob-S蛋白质制备成疫苗,按1羽0.3 ml(含50μg的重组病毒)免疫6周龄非免海兰褐雏鸡,在免疫后第2周可检测到血凝抑制抗体效价达8.5 lg2,在第3周达到高峰(9.5 lg2),表明重组Knob-S蛋白质具有较好的免疫原性。; 郑金陈滔陆吉虎高峰候继波黎满香唐应华; 关键词：真核表达杆状病毒表达系统

重组减蛋综合症病毒Knob-S蛋白免疫原性及鸡IL-2和IL-18对其实、免疫增强效应研究: 减蛋下降综合症(Egg dorp syndrome EDS)是由减蛋下降综合症病毒(Eggdorp syndrome virus EDSV)引起的使禽产蛋下降为主要特征的传染病,给蛋鸡养殖带来了巨大经济损失。传统的灭活苗...; 陈滔; 关键词：减蛋综合症病毒

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陈滔