马鸣潇
- 作品数：10 被引量：27H指数：3
- 供职机构：解放军军需大学军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省应用基础研究项目吉林省科技厅发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡IL-18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
- 2004年
- 目的 以鸡脾细胞mRNA为模板扩增编码鸡IL 18成熟蛋白的cDNA ,并在大肠杆菌中进行表达。方法 用PHA和LPS激活的AA肉鸡脾细胞 ,提取mRNA ,以RT PCR法扩增出编码鸡IL 18成熟蛋白的cDNA并测序 ,与pET 2 8b载体构建重组质粒 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS中表达 ,用SDS PAGE检测表达产物。结果 所克隆的核苷酸片段包含了鸡IL 18全部成熟蛋白编码基因 ,其大小为 5 0 7个核苷酸 ,编码 16 9个氨基酸 ;构建的重组表达载体在大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS中表达出相对分子质量为 190 0 0的重组蛋白。结论 已成功克隆和表达了鸡IL 18成熟蛋白基因。
- 王振国金宁一马鸣潇张洪勇尹革芬金扩世
- 关键词：白细胞介素18IL-18原核表达克隆大肠杆菌
- O型口蹄疫病毒不同基因型联合RT-PCR检测方法的建立被引量：7
- 2005年
- 在比较国内外口蹄疫病毒 (FMDV)流行毒株序列的基础上 ,设计了检测 FMDV的 PCR引物及 O型 FMDV不同基因型即中国型 (Cathay)与乏亚株 (Pan Asia)的二联 PCR引物。在确定单项 RT- PCR反应条件的基础上 ,建立、优化了二联 RT- PCR反应体系和条件 ,并进行了相关病毒检测试验。结果表明 ,建立的检测 O型 FMDV不同基因型中国型与泛亚株的二联 RT- PCR,有效、特异且敏感 ,为 FMD的诊断。
- 葛淑敏金宁一尹革芬郑敏张洪勇王振国马鸣潇
- 关键词：FMDVO型口蹄疫基因型RT-PCR检测口蹄疫病毒
- H_5N_1亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及分子进化分析被引量：1
- 2004年
- 用RT＿PCR法,以1株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA。将cDNA克隆于pMD18＿T载体,并对其进行测序。测序结果表明所克隆的1542个核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸。将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92 5%～95 9%,编码的氨基酸同源性为97 0%～98 4%。本研究通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系。
- 王振国金宁一马鸣潇金扩世张洪勇尹革芬葛淑敏
- 关键词：RT-PCR禽流感病毒NP基因分子进化分析
- H_5N_1亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及分子进化分析被引量：6
- 2004年
- 用RT-PCR法,以1株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NP全基因cDNA。将NPcDNA克隆于pMD18 T载体,并对其进行测序。测序结果表明:所克隆的NP基因全长1542bp,该核苷酸的片段包含了核蛋白完整阅读框架,其中编码区为1497个核苷酸,编码498个氨基酸。将其序列与6株A型流感病毒NP基因序列进行比较,各毒株之间NP基因核苷酸序列同源性为92 5%～95 9%,编码的氨基酸同源性为97 0%～98 4%。通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系。
- 王振国金宁一马鸣潇张洪勇郑敏尹革芬
- 关键词：禽流感病毒NP基因分子进化分析
- 6株O型口蹄疫病毒结构蛋白vp1基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2004年
- 提取6株O型口蹄疫病毒(FMDV)(T1-T6)的RNA,用一对通用引物经RT-PCR方法将6株FMDVVP1基因片段扩增出来。克隆测序,核苷酸序列分析表明,T1-T6六株vp1基因的核苷酸序列同源性在95%～99.8%之间,氨基酸序列同源性在94.8%～100%之间。T1-T6六株病毒vp1基因的核苷酸序列与已经发表的O/HKN/14/82、O/TAW/81/97、O/PHI/7/96、O/HKN/1/99和O/HKN/16/96的同源性较高,核苷酸序列同源性在86.1%～95.8%之间;发现6株毒株的主要中和抗原表位140-160、200-213位的氨基酸序列完全相同,推测它们有相近的中和抗体表位和抗原性。故推断本试验中的6株FMDV株属于同一基因型,即FMDVO型中国拓朴型(Cathaytopotype)。
- 葛淑敏金宁一尹革芬郑敏王振国马鸣潇
- 关键词：口蹄疫病毒克隆
- H5和H9亚型禽流感病毒联合RT-PCR检测方法的建立被引量：4
- 2004年
- 目的建立H5和H9亚型禽流感病毒(AIV)联合RT-PCR检测方法。方法针对H5和H9亚型AIV血凝素(HA)基因,在其裂解位点两侧设计引物。在确定单项RT-PCR检测方法反应条件基础上,建立、优化联合RT-PCR反应体系和反应条件,并通过相关病毒检测试验,验证其敏感性和特异性。结果所建立的H5和H9亚型联合RT-PCR检测方法具有特异、敏感、简便、快捷等特点。结论该方法可用于AIV的检测及致病性分析。
- 马鸣潇金宁一王振国郑敏费东亮
- 关键词：禽流感病毒H5H9质粒
- 禽流感病毒反转录聚合酶链式反应检测方法及试剂盒
- 一种禽流感病毒反转录聚合酶链式反应检测方法及试剂盒，属于生物技术领域，特别是涉及一种禽流感病毒检测的方法。本发明目的在于建立了禽流感病毒通用型RT－PCR检测方法和H5、H7、H9亚型分型检测的三联RT－PCR检测方法，...
- 金宁一马鸣潇郑敏李昌王振国金扩世秦晓冰鲁会军夏志平金洪涛
- 文献传递
- H_5N_1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2004年
- 应用RT—PCR方法,以1株H5N1亚型禽流感病毒RNA为模板,扩增了NA全基因cDNA。将NA cD-NA克隆于pMD18-T载体,并对其进行了测序。测序结果表明:所克隆的NA基因全长为1416 bp,编码区为1410个核苷酸,编码469个氨基酸。将其序列与5株H5N1亚型禽流感病毒NA基因序列进行比较,其核苷酸和氨基酸同源性均为96.6％～99.1％。NA的克隆和分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系。
- 王振国金宁一郑敏马鸣潇张洪勇尹革芬
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因克隆
- H_5N_1亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆及分子进化分析被引量：1
- 2004年
- 目的 克隆H5N1 亚型禽流感病毒HA基因并进行分子进化分析。方法 应用RT PCR方法 ,以 2株H5N1 亚型禽流感病毒RNA为模板 ,扩增了HA全基因cDNA。将HAcDNA基因克隆于pUCm T载体 ,并对其进行了测序。结果 所克隆的HA基因全长为 1731bp ,共编码 5 6 8个氨基酸。将该毒株与其它 10株H5亚型禽流感病毒HA基因序列核苷酸及氨基酸进行比较 ,其核苷酸同源性在 80 5 %～ 99 2 %之间 ,氨基酸序列同源性在 89 4 %～98 6 %之间。高致病性毒株HA基因裂解位点存在多个碱性氨基酸插入。结论 为禽流感基因工程疫苗的研制奠定了基础 ,同时通过分子进化分析也揭示了各毒株间的亲缘关系。
- 王振国金宁一马鸣潇金扩世张洪勇尹革芬
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒血凝素分子进化亲缘关系
- 禽流感病毒核蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2004年
- 目的 以 1株H5N1 亚型禽流感病毒RNA为模板扩增NP全基因cDNA ,并在大肠杆菌中进行表达。方法 提取禽流感病毒RNA ,以RT PCR法扩增编码NP基因cDNA并测序 ,将其克隆到pET 2 8a原核表达载体 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS中表达 ,用SDS PAGE和Westernblot检测表达产物。结果 所克隆的核苷酸片段包含了核蛋白基因完整阅读框架 ,编码 4 98个氨基酸 ,构建的重组表达载体在大肠杆菌BL2 1(DE3)plysS中表达出相对分子质量约为 5 5 0 0 0的重组蛋白 ,该重组蛋白具有良好的免疫原性。结论 已成功克隆和表达了禽流感病毒核蛋白基因 。
- 王振国金宁一马鸣潇郑敏张洪勇
- 关键词：禽流感病毒核蛋白克隆大肠杆菌
