朱莹莹
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：长江大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 重组猪尿酸氧化酶PEG化修饰的影响因素考察被引量：2
- 2013年
- 目的:考察mPEG-SC与重组猪尿酸氧化酶(recombinant porcine urate oxidase,rPUOX)摩尔比值,碳酸缓冲液pH值和浓度,以及酶浓度对rPUOX PEG化的影响。方法:用mPEG-SC对纯化rPUOX进行PEG化修饰。通过酶残余活力测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对修饰效果进行评估。结果:随着mPEG-SC/rPUOX摩尔比值的提高,修饰程度也提高。在pH 10.1及其以下的碳酸缓冲液中rPUOX修饰不充分,pH 10.5修饰效果最好,pH 11.6效果下降。碳酸缓冲液为0.02 mol.L-1时,rPUOX溶解不完全,0.06和0.1mol.L-1的溶解和修饰均比较理想,0.1 mol.L-1溶液中rPUOX残余活力较高。摩尔比值相同的条件下,随着酶浓度的提高修饰效果也提高,5 mg.mL-1的酶浓度更加适合修饰反应。结论:优化的rPUOX PEG化的条件是:mPEG-SC/rPUOX摩尔比值为18.6倍;碳酸缓冲液的pH值为10.5,浓度为0.1 mol.L-1;酶质量浓度为5 mg.mL-1。
- 朱莹莹荣俊匡红艳孙中杰
- 关键词：PEG化PH
- 猪原环病毒2型衣壳蛋白含量与抗原滴度的相关性研究被引量：1
- 2012年
- 将猪圆环病毒2型衣壳蛋白原核表达工程菌用PBS溶解破碎后,经2次50%饱和度硫酸铵沉淀,用Brodford法分别测定不同稀释度的原核表达菌破菌液中的蛋白含量,同时进行琼脂双向免疫扩散试验(AGP),48h观察免疫沉淀线,以出现免疫沉淀线的表达产物最高稀释倍数为该抗原的滴度,并由此探讨猪圆环病毒2型衣壳蛋白(PCV2-CAP)原核表达产物中总蛋白含量与抗原滴度之间的相关关系。结果表明,AGP最小检出值为0.255mg(蛋白)/ml,表达产物总蛋白含量在0.255～0.857mg/ml与以0.5为底的AGP滴度的对数成正相关关系(R^2=0.9938)。当总蛋白含量超过0.857mg/ml时抗原滴度变化不再相关联。可见,AGP能检出表达产物中总蛋白的最低值为0.255mg/ml,最高值为0.857 mg/ml,在此区间内蛋白含量与AGP滴度成正相关关系,可以通过测定蛋白含量估算抗原滴度。
- 朱莹莹荣俊匡红艳
- 关键词：猪圆环病毒2型蛋白含量滴度
- 猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白基因的克隆与表达研究
- 猪圆环病毒2型是1997年由Clark等研究人员从加拿大西部患有断奶仔猪多系统衰竭综合征的猪群中分离到的,该病毒是一种小的致病性的单链DNA病毒,与猪皮炎与肾病综合征、先天性震颤、后期流产和渗出性皮炎等疾病密切相关,对全...
- 朱莹莹
- 关键词：猪圆环病毒2型原核表达免疫检测蛋白纯化
- 文献传递
- 斑马鱼尿酸氧化酶基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2014年
- 目的探讨斑马鱼尿酸氧化酶基因的克隆与原核表达的方法,研究重组斑马鱼尿酸氧化酶(ZUO)的理化性质与生物学功能。方法用PCR的方法克隆斑马鱼尿酸氧化酶基因,用pET28a质粒进行原核表达。结果成功克隆了斑马鱼尿酸氧化酶基因并完成了测序鉴定,该基因在大肠杆菌表达系统中得到有效表达且具有体外氧化尿酸的生物学功能。目的蛋白为胞内可溶性蛋白,占可溶蛋白总量的50%左右。最佳诱导条件为27℃16 h,粗酶最佳溶解pH为9.16,在此缓冲液溶解条件下,粗酶比活性为1.94 U/mg。获得的重组ZUO产量达64.8 U/g湿菌,高于直接从动物肝脏组织萃取的尿酸氧化酶。结论斑马鱼尿酸酶基因能在大肠杆菌表达系统中表达,其溶解pH比基因工程表达的重组猪尿酸氧化酶略低,对后续开发痛风治疗新药有利。
- 匡红艳荣俊朱莹莹
- 关键词：斑马鱼尿酸氧化酶
