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宋玉杰
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1
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供职机构:
山东大学附属省立医院
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相关领域:
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李亚伟
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2012
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人糖皮质激素受体β与绿色荧光蛋白融合基因共表达慢病毒载体的构建
2012年
目的:构建人糖皮质激素受体(GR)β与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的慢病毒载体。方法:采用基因重组技术从人胚脑表达文库内获得人GRβcDNA,双酶切法将目的片段克隆入pGC-LV载体中,获得重组载体pGC-FU-GRβ。测序正确的质粒pGC-FU-GRβ通过脂质体Lipofectamine 2000转染293T细胞。通过荧光检测和Western Blot检测鉴定慢病毒表达载体质粒。与辅助包装质粒转染293T细胞,包装后产生病毒液,Real-timePCR法测定其滴度。结果:成功构建人GRβ-GFP重组慢病毒表达载体,转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光,Western Blot检测到GRβ-GFP融合蛋白的表达。Real-time PCR测定病毒滴度为2.00E+8TU/ml。结论:成功构建了人GRβ与GFP基因共表达的慢病毒表达载体,为探讨以激素为首选药物的慢性鼻-鼻窦炎等疾病治疗中GRβ与激素治疗敏感及抵抗的关系,提供了稳定的感染细胞载体。
王明明
时鹏
宋玉杰
李亚伟
王海波
关键词:
糖皮质激素受体Β
绿色荧光蛋白
慢病毒载体
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