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赵海娇
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哈尔滨医科大学
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
庄敏
哈尔滨医科大学
张雪莹
哈尔滨医科大学
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凌虹
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2016
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融合肽抑制剂T20抵抗株包膜蛋白热变异位点547对人类免疫缺陷病毒-1生物学功能的影响
2016年
目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)的融合肽抑制剂T20抵抗突变株热变异位点547对病毒生物学功能的影响。方法采用PCR和定点突变方法构建HIV包膜蛋白(Env)突变体pSM-HXB2-DIV/DIM/SIM和PSM—LAI-DIV四种表达质粒,并构建了含有547D突变并置换HXB2或LAI株gp120部分的Env质粒,pSM-LAIgp120/HXB2gp41-DIV(L/H-DIV)和pSM-HXB2gp120/LAIsp4t—DIV(H/L-DIV)。假病毒感染实验和细胞融合实验分析Env的功能;Westernblot检测Env表达。圆二色谱(CD)分析6螺旋束(6HB)的稳定性;PyMOL软件分析含有547D的6HB结构。结果HXB2为骨架的547DIV、DIM及SIM和LAI为骨架的DIV假病毒的感染性低于其野生型(wt),前者的各变异Env的融合活性也明显降低;L/H—DIV假病毒感染性与HXB2wt相似,但融合活性明显低于wt;H/L—DIV假病毒的感染性低于两种野生型,融合活性与LAI叭相似,但低于HXB2wt。CD结果证明547D突变降低6HB的稳定性;结构分析显示,547D突变没有改变NHR中该位点与CHR中Q652位点之间的氢键,但可能通过增加NHR的负电荷从而减少病毒与T20的结合。结论547D突变降低LAI与HXB2株的感染性和HXB2株的融合活性;该突变通过降低6HB稳定性和增加gp41所带负电荷来减少病毒与T20的结合。
赵海娇
原晨
张雪莹
凌虹
庄敏
关键词:
人类免疫缺陷病毒
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