- siRNA沉默Ran基因对结肠癌细胞株凋亡和Caspase-3、PARP表达的影响被引量：1
- 2017年
- 背景:结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一。本课题组前期研究发现结肠癌特异性抗原类硫氧还蛋白-2(Txl-2)的亚型之一Txl-2b可与Ras相关核蛋白(Ran)相互作用,但Ran在结肠癌发病过程中的作用和机制鲜有报道。目的:以RNA干扰技术靶向沉默结肠癌细胞株Ran基因,观察该方法对细胞凋亡和半胱天冬酶-3(caspase-3)、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)表达的影响。方法:设置si-1、si-2、si-3以及阴性对照(NC)组,分别将终浓度为20、40、60 nmol/L的Ran小干扰RNA(siRNA)-1、siRNA-2、siRNA-3以及NC siRNA转染结肠癌细胞株HCT116、DLD-1。采用蛋白质印迹法检测siRNA干扰效率以及caspase-3、PARP表达的变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:20 nmol/L siRNA-1、siRNA-2抑制Ran表达的效果最佳。si-1组HCT116、DLD-1细胞的早期凋亡率较NC组显著增加(19.37%±7.57%对4.83%±1.72%;16.53%±3.38%对6.27%±3.13%;P均<0.05)。si-1组、si-2组HCT116、DLD-1细胞的晚期凋亡率较NC组显著增加(15.97%±3.31%、16.33%±5.40%对6.40%±1.05%;22.93%±1.57%、11.50%±0.70%对6.20%±0.98%;P均<0.05)。si-1组、si-2组DLD-1细胞与NC组相比,被切割的caspase-3(活性形式)和被切割的PARP(非活性形式)表达水平显著升高。结论:沉默Ran基因能明显促进结肠癌细胞凋亡,其机制与调控caspase-3、PARP表达有关。
- 汪鑫耿蕾孙丽娜孙利慧卢瑗瑗王新
- 关键词：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
- siRNA沉默雄激素受体对人结肠癌HCT-8细胞增殖、迁移及侵袭的影响被引量：2
- 2017年
- 目的:利用小干扰RNA(siRNA)沉默人结肠癌HCT-8细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达,观察AR敲除对癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,初步探讨AR在结肠癌中的功能。方法:利用qRT-PCR和Western blot检测HCT-8细胞及正常人肠上皮细胞中AR的表达;siRNA转染HCT-8细胞沉默AR表达,利用qRT-PCR和Western blot检测转染效率;流式细胞术检测沉默AR后对HCT-8细胞周期的影响;CCK-8法检测沉默AR后对HCT-8细胞增殖的影响;Transwell实验检测沉默AR后对HCT-8细胞迁移及侵袭的影响。结果:AR在人结肠癌HCT-8细胞中高表达;siRNA能有效沉默HCT-8细胞中AR的mRNA及蛋白的表达。与对照组相比,沉默AR表达能够明显抑制HCT-8细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:AR在人结肠癌HCT-8中高表达并能够促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
- 耿蕾汪鑫孙丽娜孙利慧赵晓迪王新
- 关键词：雄激素受体增殖迁移结肠癌
- miR-181d在结肠癌中表达失调并抑制癌细胞增殖及凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的检测结肠癌细胞系中miR-181d的表达水平,研究miR-181d对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 RTqPCR检测结肠癌细胞HCT116,HT29,LoVo,SW480及SW620和永生化肠黏膜上皮细胞HIEC中miR-181d的表达。在LoVo细胞中转染miR-181d模拟物及对照,SW620细胞中转染miR-181d抑制物及对照,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡比例。结果 miR-181d表达水平在各结肠癌细胞系中均较正常肠黏膜上皮细胞HIEC显著降低(F=29.34,P<0.01)。在LoVo细胞中过表达miR 181d能够显著减慢细胞体外增殖(F=5.403,P<0.01),细胞周期检测示S期细胞比例降低(t=4.71,P<0.05),凋亡细胞显著增多(t=3.47,P<0.05)。在SW620细胞中抑制miR-181d的表达能够显著加快细胞体外增殖(F=20.82,P<0.01),细胞周期检测示细胞周期加速,S期细胞比例增高(t=2.92,P<0.05),细胞凋亡率显著减少(t=4.14,P<0.05)。结论 miR-181d在结肠癌细胞系中表达普遍下调,有望成为结肠癌新的诊断标志物。miR-181d能够通过抑制结肠癌细胞增殖和促进凋亡,发挥抑癌基因的作用。
- 吴奇申高飞孙丽娜汪鑫耿蕾杜风赵晓迪卢瑗瑗
- 关键词：结肠癌增殖凋亡
