张万江
- 作品数：4 被引量：26H指数：3
- 供职机构：华西医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省学术和技术带头人培养资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 赖型钩端螺旋体外膜蛋白基因结构比较性研究被引量：5
- 2000年
- 用 PCR方法扩增不同毒力赖型钩体 Omp L1基因片段 ,进行序列测定 ,用相关软件比较分析核苷酸序列、蛋白质二级结构以及限制性内切酶谱 .不同毒力赖型钩体均能扩增出960 bp的片段 ,非致病 Patoc株未能扩出相应片段 ,中国赖型参考株 Omp L1序列 ( Gene BankNo.AF2 50 31 8)与流感伤寒型相应序列比较有 98个核苷酸差异 ,同源性为 89.8% ,二级结构预测和氨基酸疏水图显示变异主要发生在跨膜蛋白的膜外区 ,其膜上成分并未明显变化 ;赖型强弱毒力株之间 Omp L1序列仅 8个核苷酸差异 ,6个氨基酸变异 ,且集中在 C末端 2 92 -30 5位氨基酸之间 ;限制性内切酶谱分析显示赖型 Omp L1基因位点发生特异变化 .结果提示 ,外膜蛋白 Omp L1基因是钩体保守性较强的致病标记 ;赖型钩体减毒致弱可能与 Omp
- 胡昌华鲍朗晏菊芳李学敏张万江张会东
- 关键词：赖型钩端螺旋体外膜蛋白蛋白质二级结构
- 利用抑制消减杂交技术研究钩端螺旋体致病相关基因被引量：16
- 2001年
- 目的 利用抑制消减杂交技术 (SSH) ,比较致病与非致病钩端螺旋体 (简称钩体 )之间基因组差异 ,筛选致病钩体特有的基因片段。方法 以赖型 0 1 7株为tester,非致病性patocⅠ株为driv er,选择合适的四碱基内切酶将基因组酶切 ,连接特殊设计的adaptor进行消减杂交和PCR ,得到消减混合物 ,与T/A克隆载体连接 ,转化JM1 0 9建立差异消减文库 ,经PCR和Southernblot筛选鉴定阳性克隆 ,进而对部分片段进行测序和同源分析。结果 AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段 ;经SSH筛选鉴定得到 3 0个片段大小为 2 0 0～ 1 3 0 0bp的阳性克隆 ,部分已测序的片段中 1个与硫胺素合成蛋白高度同源 ,4个与GenBank无明显同源性 ,可能为赖型致病钩体所特有而非致病钩体缺失的基因片段 ,已被GenBank收录 ,收录号分别为AF3 0 0 873～ 3 0 0 877。结论 SSH是一种有效、灵敏、高特异的比较分析基因组差异的方法 ,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义。
- 鲍朗胡昌华李学敏晏菊芳张万江张会东
- 关键词：钩端螺旋体抑制消减杂交
- 人外周血单个核细胞CD14基因的扩增及序列测定
- 2000年
- 目的 介绍一种获取人 CD14基因的简易方法。方法 利用 CD14基因组成的特点 ,采用聚合酶链反应技术以人外周血单个核细胞基因组 DNA为模板扩增获取人 CD14基因。结果 从人外周血单个核细胞基因组 DNA中成功扩增出大小约 1.1kb的人 CD14基因 ,并且经基因序列测定表明 ,克隆的人CD14基因序列与文献报道完全相同。结论 以人外周血单个核细胞基因组 DNA为模板 ,扩增人 CD14基因的方法是一种获取 CD14基因简捷、有效的方法。
- 张万江鲍朗邱洪宇晏菊芳胡昌华张会东
- 关键词：单个核细胞CD14基因
- 钩端螺旋体外膜蛋白基因重组载体构建及在卡介菌中的表达被引量：5
- 2000年
- 目的 研制一种高效广谱的新型钩体疫苗。方法 用PCR方法扩增致病性钩端螺旋体赖型 0 17株外膜蛋白OmpL1基因 ,将其克隆入大肠杆菌—分枝杆菌穿梭质粒载体pMV2 6 1和pMV36 1中。结果 筛选到两个重组载体pBQ1和pBQ2 ,通过电穿孔导入卡介菌 ,重组体经诱导表达了相对分子质量约为 35 0 0 0的融合蛋白。
- 邱洪宇鲍朗晏菊芳谢勇恩徐恒冯云陈玮张会东张万江
- 关键词：钩端螺旋体外膜蛋白卡介菌
