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旋毛虫表皮胶原蛋白基因的原核表达被引量：1: 2003年; 目的构建表皮胶原蛋白基因X21的原核表达载体pET28-X21ex,诱导其表达胶原蛋白。方法应用PCR技术扩增目的基因X21,纯化后将其克隆入表达载体pET28a,重组质粒经酶切鉴定后,转入大肠杆菌DE3诱导表达,利用SDS-PAGE检测胶原蛋白的表达效果。结果利用DNA重组技术构建了表皮胶原蛋白基因X21的原核表达载体pET28-X21ex,转化大肠杆菌后经诱导表达了30kDa的融合蛋白,以诱导3h的表达量最高,在35%以上。结论旋毛虫表皮胶原蛋白基因X21在大肠杆菌中能够高效表达,为进一步研究旋毛虫表皮胶原蛋白的结构与功能奠定了基础。; 王峰武峰付宝权对明远赵培荣; 关键词：旋毛虫基因重组质粒

登革病毒组织培养技术被引量：6: 2002年; 目的 :探讨对登革病毒敏感性不同的几株蚊子细胞和哺乳动物细胞的体外培养技术。方法 :对白纹伊蚊C6/3 6细胞、伪盾伊蚊Ap 61细胞和三株哺乳动物细胞LLC MK2 细胞、Vero细胞、BHK 2 1/3 1细胞进行体外培养 ,把登革病毒转染到上述细胞中 ,经传代培养后 ,在显微镜下观察。结果 :通过观察结果及时改进各细胞株的培养基的配制、消化方法和传代比例 ,各细胞株均能生长良好、单层致密、无污染 ,登革病毒转染实验呈阳性结果。结论 :实验结果证明白纹伊蚊C6/3 6细胞、Ap 61细胞、LLC MK2 细胞、Vero细胞、BHK 2 1/3 1细胞均为登革病毒敏感细胞 ,其中白纹伊蚊C6/3 6细胞敏感性较高 ,随着新的克隆细胞株的体外培养技术的成熟 ,组织培养已成为登革病毒分离。; 李雪莲武峰王莹; 关键词：登革病毒组织培养技术 C6/36细胞 VERO细胞

旋毛虫5日龄成虫期特异性基因的筛选与序列分析被引量：2: 2003年; 目的　获得旋毛虫 5日龄成虫期特异性基因序列。方法　应用旋毛虫 5日龄成虫期待异性探针对 5日龄成虫cDNA文库进行杂交筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,登陆InterProScan进行基因、氨基酸序列分析。结果　利用消减杂交 (subtractedhybridization)获得的旋毛虫 5日龄成虫期特异性探针筛选 5日龄成虫cDNA文库 ,获得一个长 1 1 32bp的基因。其开放阅读框架由 1 0 30个核苷酸组成 ,编码 343个氨基酸。序列分析表明 ,该序列是一个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,在序列 1 1 7～ 1 2 0位氨基酸为氨基葡聚糖 (GAG)结合位点 ,在 2 7～ 86 ,1 5 3～ 32 8位氨基酸处存在Gly -X -Y胶原蛋白重复序列 ,分别编码两个胶原蛋白多肽。结论　获得旋毛虫 5日龄成虫期特异性基因。; 王峰杨继要武峰付宝权刘明远赵培荣; 关键词：旋毛虫 CDNA文库消减杂交

人铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆表达及活性鉴定被引量：4: 2006年; 目的获得高表达人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的工程菌。方法采用RT-PCR技术从人胃组织总RNA中分离扩增了hCu/Zn-SOD的cDNA序列,将该基因重组到T7启动子控制下的分泌型表达载体pET22b(+)中,构建了表达质粒pETSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析其活性。结果该工程菌可高表达一相对分子质量大约16kD的蛋白,与抗人Cu/Zn-SOD多克隆抗体有特异的免疫反应,表达量可达菌体可溶性蛋白的20%以上,且具有特异性SOD酶活性。结论该菌株分泌表达了有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,为大量制备hCu/Zn-SOD和下一步研究工作奠定了基础。; 李雪莲武峰史兆兴; 关键词：铜锌超氧化物歧化酶分泌表达大肠杆菌

人铜锌超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及在酿酒酵母中的分泌表达被引量：6: 2007年; 目的:探讨酿酒酵母中人铜锌超氧化物歧化酶(hCu/Zn-SOD)的分泌表达。方法:采用RT-PCR技术从人胃总RNA中分离扩增hCu/Zn-SOD的cDNA,与酿酒酵母交配因子(MF)α信号肽编码序列融合,将融合基因插入大肠杆菌-酵母细胞穿梭型质粒pYES2.0,构建真核分泌表达质粒pYES-MS,将其转化入酿酒酵母的缺陷型菌株INVSc1中,用半乳糖进行诱导表达,采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析及电泳谱活性染色测定表达产物分泌情况及其活性。结果:该工程菌可高效表达一相对分子质量约为21000的蛋白并与兔抗人Cu/Zn-SOD多抗有特异的免疫反应,同时在培养基上清中检测到此表达蛋白的分泌,具有特异性SOD酶活性。结论:作者成功构建了pY-ES-MS/INV菌株,该菌株大量表达有天然酶活性的hCu/Zn-SOD,并有部分hCu/Zn-SOD分泌到酵母细胞外,为开发hCu/Zn-SOD的基因工程产品奠定了良好的基础。; 李雪莲马一君武峰史兆兴王恒梁黄留玉; 关键词：酿酒酵母分泌表达

AutoCAD接口技术研究被引量：5: 2002年; 讨论了AutoCAD的 .SCR文件、.DXF文件、AutoLisp语言、C语言等接口技术 :.SCR文件简单易作 ,但无法修改已有的图形数据库 ,且运行速度慢 ;.DXF文件是AutoCAD的主要接口方式 ,易于实现高级语言自动生成 ,但格式复杂、信息量大 ;AutoLisp语言是一种功能很强的接口方式 ,简单易用、灵活方便 ,但查询或修改速度慢、运算能力差 ;C语言的ADS与AutoLisp的大部分功能等价 ,但C语言更适用于计算量大、主机环境交互较多的场合 .在计算机辅助设计中一般选用 .SCR和 .DXF这 2种接口方式 ,要实现参数化绘图 ,可利用AutoLisp语言 ,更高级的应用可使用C语言 .总之 ,无论选用何种接口方式 ,其目的均应是使系统达到最佳运行状态 .; 窦宪民李菊丽武峰; 关键词：接口技术 AUTOCAD 计算机辅助设计

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武峰