翁长江
- 作品数：97 被引量：231H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 值得综合开发利用的野生饲用植物——葛藤被引量：1
- 1992年
- 葛藤[Pueraria lobata Ohwi]为豆科多年生藤本植物.茎叶可作饲料;根和花可以入药;其根深叶茂,能保持水土;藤可取麻,根可取葛粉.因此开发利用葛藤对山区畜牧业发展,水土保持和山区人民脱贫致富均有重要意义. 一、葛藤特征和特性 1、特征:葛藤全株被黄褐色茸毛;块根肥厚;茎细长,葡匐生长,常缠于他物之上;三复叶,顶生小叶菱状宽卵形,长6-20厘米,宽7-20厘米,先端渐尖,基部圆形,有时浅裂,两侧的两个小叶宽卵形,基部斜形,各小叶下面有粉霜,托叶盾形,小托叶针状.总状花序腋生,长20厘米;花蓝紫色或紫色;花萼钟状,萼齿5,披针形,上面2齿合生,下面1齿较长;花冠蝶形,长约1.5厘米.荚果条形,扁平,长9厘米,宽9-10毫米;种子长椭圆形;红褐色.
- 翁长江
- 关键词：饲料野生植物
- 猪源GSDMD蛋白多克隆抗体的制备及初步应用
- 2024年
- 为制备猪源GSDMD多克隆抗体,构建了重组表达质粒pET-21a-nGSDMD,成功表达并纯化了重组nGSDMD蛋白。将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备nGSDMD多克隆抗体(pAb),经ELISA检测,抗体效价为1∶64000。Western-blot和IFA显示该抗体能特异性识别HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-GSDMD蛋白和PRRSV感染肺泡巨噬细胞(PAMs)后表达的GSDMD蛋白。该多克隆抗体特异性良好,无交叉反应,能识别检测病毒感染条件下GSDMD切割片段,可用于PRV和PRRSV诱导的细胞焦亡检测。综上,本研究为探究GSDMD蛋白提供了良好的工具,为深入探究GSDMD蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 刘佳宋洁李帅王尚辉李江南李江南翁长江王春凤
- 关键词：多克隆抗体效价
- DDX19参与PRRSV复制及在NLRP3介导的炎症反应中的功能
- 炎症反应在机体天然免疫和获得性免疫中有重要作用.NLRP3介导的炎症小体通过激活caspase-1,促进白介素-18(IL-18)、白介素1β(IL-1β)等细胞因子的分泌介导炎症病理的发生.发现高致病蓝耳病病毒(HP-...
- 李江南李园园胡亮黄丽翁长江
- 关键词：炎症反应基因复制
- 文献传递
- “母服仔猪白痢散”治疗仔猪白痢效果的跟踪调查
- 1996年
- “母服仔猪白痢散”又叫“一窝灵”,系浙江省安吉兽药厂生产,主治仔猪白痢。该药经母猪内服后,能先治愈母体隐性疾病,净化乳汁,并将药效成分随乳汁进入仔猪体内,达到治愈仔猪疾病的目的。仔猪无需打针灌药,给药方便。我站从1994年初开始使用及销售该产品,至1995年底销售量为0.8万包(80克/包),居其他治白痢的药物之首。为验证该产品的疗效,我们进行了跟踪调查。共调查271窝1842头患病仔猪,其中治愈254窝1729头,以窝数计算,治愈率为93.73％;以头数计算,治愈率为93.87％。1.材料和方法1.1.功能与用法:该药由牵牛子、白头翁、皂矾、红糖等组成,具有健脾利湿、清热解毒、化积导滞、杀虫利水、敛肠止痢的功能。用法:每日早晚各一包,开水冲泡半小时后,拌料让母猪内服。1.2.疗效判定;母猪服药2～5次后。
- 翁长江严永光
- 关键词：猪病仔猪猪白痢白痢散
- 2株猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及其基因测序
- 2012年
- 2006年，我国爆发了高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP—PRRSV），给养猪业造成了严重的经济损失，该HP-PRRSV在Nsp2区有30个氨基酸的不连续缺失。分子流行病学调查证实，目前我国流行的PRRSV毒株主要是HP—PRRSV毒株。2011年，从山东某猪场成功分离到2株PRRSV，分别命名为PRRSV-SDA2和PRRSV—SDA3；基因测序结果显示PRRSV-SDA2全长为15349bp，PRRSV-SDA3全长为15350bp。通过与涵盖欧洲型和北美型的24个毒株全基因比对，发现这2个毒株均属于北美型HP—PRRSV，与HuN4毒株的同源性最高，均高达99．5％，其NSP2蛋白的482和533～561位缺失了30个氨基酸。成功分离的SDA2和SDA32个HP—PRRSV及完成的基因测序，为构建HP—PRRSV毒株的感染性克隆奠定了基础。
- 张枫李江南尹曼曼郭东伟刘琴芳王朝翁长江熊涛
- 关键词：基因测序NSP2
- 非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
- 2024年
- 【目的】获得可溶性非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p54蛋白和抗p54蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibodies, mAb),并分析其识别的线性抗原表位,为p54蛋白结构和功能的研究及血清学诊断试剂的研发奠定基础。【方法】构建了重组原核表达质粒pET-21a-E183L,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,表达并利用Ni2+柱和分子筛纯化得到p54重组蛋白。以该蛋白为抗原免疫5周龄SPF级BALB/c小鼠,每两周免疫一次,共免疫3次,首免时将p54蛋白与弗氏完全佐剂混匀乳化(150μg/只),二免、三免使用弗氏不完全佐剂。三免7 d后对小鼠进行尾部采血,使用ELISA方法测定小鼠血清抗体效价,选取效价高的小鼠进行加强免疫。3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,利用重组p54蛋白作为包被抗原,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆纯化,直至筛出能够稳定分泌抗体的mAb细胞株,并制备腹水。以pCAGGS-Flag-E183L质粒转染的HEK293T细胞和ASFV Pig/HLJ/18株感染的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)为抗原,以筛选得到的mAb为一抗,进行Western blot鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)。使用单抗亚类鉴定试剂盒检测该mAb重链和轻链类型。随后,将p54蛋白逐步截短并与GST标签融合表达后进行Western blot检测,鉴定该mAb识别的抗原表位。【结果】将构建的原核表达质粒pET-21a-E183L(54-183aa)转化至BL21(DE3)感受态细胞中,使用IPTG进行诱导后,p54重组蛋白大部分以可溶的形式在上清中表达,分子量约为17 kDa。以纯化得到p54重组蛋白免疫小鼠,三免后7 d的血清效价为1:409 600,可进行细胞融合,经四次筛选和亚克隆后,获得能够稳定分泌p54蛋白mAb的细胞株,命名为5B11,成功制备腹水并纯化。Western blot和IFA试验结果显示,制备的mAb能够特异性识别HEK293T细胞中表达及ASFV感染PAMs中的p54蛋白。mAb亚类鉴定结果显示重链类型为IgG1型,轻链类型�
- 冯春莹张朝霞刘云飞黄丽翁长江
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体抗原表位
- 非洲猪瘟病毒A137R蛋白单克隆抗体的制备与表位鉴定被引量：8
- 2022年
- 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白鼠源单克隆抗体(MAb),本研究通过原核系统表达并纯化了重组A137R(rA137R),将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到2株能够稳定分泌A137R MAb的杂交瘤细胞株3D1和2C3。亚类试剂盒鉴定结果显示,两株MAb重链亚类均为IgG1,轻链亚类均为Kappa链。采用间接ELISA方法测得MAb 3D1和2C3的腹水效价均高于10^(5),选取效价较高的MAb 3D1用于后续试验。采用western blot检测制备的MAb 3D1与293T细胞中过表达的A137R(不同剂量)及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后(感染后不同时间)天然表达的A137R的反应性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测MAb 3D1与293T细胞中过表达的A137R的反应性。Western blot结果显示,过表达A137R的293T细胞出现了15 ku左右的特异性条带,且随着转染质粒量浓度的增加,蛋白表达量增加;感染ASFV的PAMs中(感染后8 h)出现了15 ku左右的特异性条带,且随着感染时间的延长,蛋白表达量增加。IFA结果显示,在过表达A137R的293T细胞中出现绿色荧光。以上结果表明,制备的MAb 3D1既能够与过表达的A137R反应,也能够与天然表达的A137R反应,反应性较强。将MAb 3D1用于激光共聚焦试验中检测ASFV感染PAMs后不同时间A137R的细胞定位;用于免疫共沉淀(Co-IP)试验中检测293T细胞中过表达的A137R和Flag-Agarose结合的反应性。激光共聚焦试验结果显示,ASFV感染PAMs后6 h出现绿色荧光,且荧光主要在细胞质中,随着感染时间的延长,绿色荧光逐渐增多增强,表明A137R主要定位于细胞质中。Co-IP试验结果显示,MAb 3D1可以检测到结合在Beads上的A137R,出现约15 ku的特异性条带,表明MAb 3D1可以用于Co-IP试验。利用一系列表达部分重叠的重组A137R片段并经western blot鉴定两株MAb识别的表位;根据western blot结果合成一系列多肽并包被ELISA板,采用间接ELISA方法进一步筛选MAb识别的抗原表位,并利用western blot验证筛
- 向志达李长尧张涛清张元峰黄丽杨玉莹翁长江
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体抗原表位
- 病毒-细菌混合感染产生“炎症因子风暴”的分子基础
- 天然免疫是机体抵抗病原微生物侵袭的第一道防线。脊椎动物能够编码多种具有种系特异性的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)来识别细菌和病毒的保守结构-病原相关分子模式(path...
- 李江南李长尧王胜男翁长江
- 关键词：模式识别受体炎症因子
- Akt1通过磷酸化泛素结合酶E2S增强胶质瘤放化疗抵抗的实验研究被引量：1
- 2018年
- 目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞（U87、U251、SF767以及U373）中泛素结合酶E2S（UBE2S）的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞中UBE2S的表达差异;构建激活型Akt1载体,分别与UBE2S野生型或T152位点突变型载体共表达,观察PTEN/Akt信号通路对UBE2S的作用,以及UBE2S过表达后对非同源末端连接复合物的影响;采用流式细胞仪检测稳定敲低UBE2S的U87胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.结果 与正常星形细胞相比,胶质瘤细胞高表达UBE2S蛋白;PTEN突变型的胶质瘤细胞UBE2S的表达较野生型更稳定.构建激活型Akt1磷酸化UBE2S的T152位点,可促进UBE2S的稳定表达.UBE2S与Ku70、Ku80相互作用能促进Ku70的表达（P =0.009）.免疫印迹结果显示,敲低UBE2S的表达后,Ku70、Ku80和DNA-PKcs的表达量显著降低（P〈0.001）.流式细胞检测结果显示,UBE2S敲低可增强胶质瘤对放、化疗的敏感性（P〈0.001）.结论 UBE2S在恶性胶质瘤中高表达;Akt1可磷酸化UBE2S的T152位点,从而增强UBE2S的稳定性;敲低UBE2S能降低非同源末端连接复合物介导的DNA修复效率,从而增强胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.
- 胡力沈红刘利谢春成王海洋刘琴芳翁长江林志国
- 关键词：神经胶质瘤化放疗
- 非洲猪瘟病毒B318L蛋白的多克隆抗体的制备及应用被引量：1
- 2023年
- 非洲猪瘟病毒(ASFV)B318L是ASFV编码的晚期蛋白,具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用,本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L,经PCR和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导并克隆至p GEX-6p-1载体中,采用GST亲和层析柱纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE检测该蛋白的表达,采用western blot鉴定重组蛋白的纯化效果和反应原性,采用超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度。结果显示,在约60 ku处出现特异性条带,且重组B318L蛋白(rB318L)主要以可溶性形式表达;纯化后在约60 ku处出现了单一特异性条带,经超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度为10 mg/m L。将纯化的r B318L 4次免疫小鼠并于3免后一周采血,采用western blot鉴定该多克隆抗体(pAb),经Protein G亲和层析介质纯化后采用SDS-PAGE进一步鉴定纯化效果,采用间接ELISA检测p Ab的效价。结果显示,制备的小鼠血清(pAb)在60 ku处出现特异性条带,其与原核表达的r B318L发生了反应;该p Ab包含重、轻链且纯度较好,且其效价可达1∶32000。将不同剂量的p CAGGS-HA-B318L(1μg、2μg、4μg)分别转染HEK293T细胞,24 h后收集细胞,将MOI 1的ASFV HLJ/18株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM),并分别于感染后6 h、12 h、24 h收集细胞。上述细胞均经相应处理后分别采用western blot、间接免疫荧光试验(IFA)(pCAGGS-HA-B318L转染剂量为1μg)检测制备的p Ab的反应原性。Western blot结果显示,HEK293T细胞中出现约35 ku的特异性条带,并随转染质粒浓度的增加B318L蛋白表达量增多;ASFV感染24 h后的PAM在35 ku处出现特异性条带,其余时间点均无该条带。IFA结果显示,过表达B318L蛋白的HEK293T细胞中出现红色荧光;ASFV感染12 h后的PAM中出现红色荧光,24 h后PAM中红色荧光的量增加。将制备的B318L p Ab用于免疫共沉淀(Co-IP)试验检测
- 刘晓红刘宏扬叶光强焦爽宿志民黄丽翁长江
- 关键词：非洲猪瘟病毒多克隆抗体
