刘慧兵
- 作品数：8 被引量：20H指数：2
- 供职机构：新乡医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南省基础与前沿技术研究计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丁烯醛对动脉内皮细胞氧化损伤的蛋白组学研究与生物信息学分析
- 2023年
- 目的通过同位素标记相对与绝对定量蛋白质组学技术筛查丁烯醛导致人动脉内皮细胞损伤进程中的氧化损伤相关蛋白标记物。方法根据细胞活力损伤曲线确定导致90%细胞损伤所需的丁烯醛药物浓度(LD90)。利用蛋白质组学技术检测丁烯醛处理和未处理过的人动脉内皮细胞的蛋白质表达情况;采用生物信息学手段分析蛋白质数据;使用平行反应监测技术进行蛋白标记物的验证;通过检测线粒体膜电位与分光光度法测谷胱甘肽活性验证目标蛋白改变对氧化损伤功能的影响。结果以倍数变化>1.5的标准(上调>1.5倍或者下调至<67%)共鉴定出153个差异表达蛋白,其中氧化损伤相关差异表达蛋白质共12种:传感蛋白(A0A2P9AJA0)、激活信号辅整合素1复合体亚基2(B1AH59)、烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1(B1AN62)、cDNA FLJ58404(B4DRL9)、cDNA FLJ55250(B4DV58)、cDNA FLJ55007(B4DY35)、氧化酶(细胞色素1)装配蛋白样1(E7EVY0,OXA1L)、电子转移黄素蛋白α亚单位(H0YL12)、细胞色素C氧化酶亚基6A(O95101)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(P48507)、细胞色素C氧化酶装配因子4(Q9NYJ1)、39S核糖体蛋白L3(P09001)。基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析显示差异蛋白明显富集的生物过程与碳水化合物、脂肪酸等有机物的代谢有关,而代谢过程则与ATP的产生、代谢氧化产物的产生和集聚、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)的相互作用等密切相关。丁烯醛作用于人动脉内皮细胞后线粒体膜电位出现明显降低,谷胱甘肽活性出现了明显下降。蛋白网络互作结果显示,OXA1L、电子转移黄素蛋白亚单位α(ETFA)、线粒体核糖体蛋白L3(MRPL3)及谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚单位(GCLM)为4个关键的候选蛋白质。结论丁烯醛改变了人动脉内皮细胞的氧化损伤相关蛋白表达模式,表现为OXA1L、ETFA、G
- 谢明章林飞张毅李杰崔小瑞莫清江赵峰王立波刘慧兵汪磊薄德映焦路阳赵国安
- 关键词：丁烯醛动脉内皮细胞蛋白组学技术
- 猪主动脉瓣膜中NADPH氧化酶2和4的表达
- 2018年
- 目的:检测NADPH氧化酶(Nox)在正常猪主动脉瓣膜及培养的瓣膜间质细胞和内皮细胞中的表达。方法:把猪主动脉瓣膜分为尖部、中部和根部,并从完整瓣膜中分离培养瓣膜间质细胞和内皮细胞。通过免疫荧光法鉴定间质细胞和内皮细胞的表型及组织中Nox主要亚型Nox2和Nox4的表达,采用Real-time PCR和Western blot方法检测瓣膜尖部、中部和根部以及间质细胞和内皮细胞中Nox2和Nox4的表达。结果:与尖部和中部相比,猪主动脉瓣膜根部Nox2和Nox4蛋白表达水平升高(P <0. 05);内皮细胞中Nox4 mRNA和蛋白的表达水平高于间质细胞(P <0. 05),但间质细胞中Nox2蛋白表达水平高于内皮细胞(P <0. 05)。结论:Nox在猪主动脉瓣膜的生理性表达具有组织和细胞特异性。
- 潘亚婷刘慧兵王立波王蕾王蕾王蕾王学惠赵国安王学惠
- 关键词：NADPH氧化酶主动脉瓣膜间质细胞内皮细胞
- 白细胞介素1α诱导破骨细胞活化和骨流失被引量：1
- 2022年
- 背景:白细胞介素1是一种重要的促炎细胞因子,已被证实在调节骨炎症和骨重建中发挥重要作用。有研究表明,白细胞介素1α可诱导MC3T3-E1细胞凋亡,同时抑制成骨细胞分化。目的:探讨白细胞介素1α在小鼠破骨细胞活化和骨流失中的作用及机制。方法:①细胞实验:分别以白细胞介素1α单独或与核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)联合作用于RAW264.7细胞1 d和4 d。CCK8检测细胞活力,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测多核破骨细胞,实时荧光定量PCR、免疫荧光染色及Western blot检测破骨形成相关的特异基因及核转录因子κB和Wnt/β-catenin信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达情况;分别以白细胞介素1α单独或与RANKL和巨噬细胞集落刺激因子联合作用于骨髓源性巨噬细胞7 d,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测多核破骨细胞,Western blot检测破骨形成相关的特异基因的蛋白水平的表达情况。②动物实验:将小鼠随机分为2组:对照组腹腔注射PBS,实验组腹腔注射白细胞介素1α溶液,每周2次,5周后取材,采用μCT、苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色和免疫荧光分析小鼠股骨骨组织变化及相关基因的表达情况。结果与结论:①细胞实验结果显示,白细胞介素1α单独干预可显著促进RAW264.7细胞增殖,而白细胞介素1α与RANKL联合作用可刺激RAW264.7细胞向破骨细胞分化(P<0.05);在RANKL或RANKL+巨噬细胞集落刺激因子存在的情况下,白细胞介素1α明显上调RAW264.7细胞和骨髓源性巨噬细胞中破骨细胞相关标志物的表达(P<0.05),并增加抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞的数量(P<0.05);白细胞介素1α显著激活RAW264.7细胞的核转录因子κB和Wnt/β-catenin信号通路(P<0.05);阻断核转录因子κB或Wnt3信号通路不仅逆转了白细胞介素1α引起的RAW264.7细胞的核转录因子κB和Wnt3信号通路的激�
- 杨锐娟李阳阳蔡瑞艳刘慧兵郭春
- 关键词：白细胞介素1ΑRAW264.7细胞抗酒石酸酸性磷酸酶核因子ΚB受体活化因子配体骨丢失
- 红景天苷在制备预防或抑制血管平滑肌细胞表型转化药物中的应用及相应药物
- 本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种红景天苷在制备预防或抑制血管平滑肌细胞表型转化药物中的应用及相应药物。所述细胞表型转化是指血管平滑肌细胞的表型由收缩型转化为分泌型，所述血管平滑肌细胞表型转化的诱导因子为血小板源性...
- 赵国安林飞李东旭刘迎春陈志刚刘慧兵闫志刚
- 文献传递
- 神经调节蛋白1β联合卡托普利对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：16
- 2017年
- 目的:探讨神经调节蛋白1β(neuregulin-1,NRG-1β)与卡托普利单用及联合应用对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:将青年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、心衰组、NRG-1β干预组、卡托普利干预组和联合用药组。采用腹主动脉-腔静脉穿刺造瘘法制备心衰模型。通过血流动力学和血浆BNP水平评价大鼠心功能,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数;Western blot检测各组大鼠左心室心肌p-Akt、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与心衰组比较,NRG-1β组、卡托普利组及联合用药组左心室舒张末压、心肌凋亡指数明显降低,±dp/dt_(max)明显升高差异有统计学意义(P<0.05);Bax蛋白表达明显降低,p-Akt和Bcl-2蛋白水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。而与NRG-1β组和卡托普利组相比,联合用药组效果更加显著(P<0.05)。结论:神经调节蛋白1β与卡托普利单用及联合应用均可有效改善心功能、抑制心肌细胞凋亡,联合用药的疗效优于单独用药。
- 王学惠刘慧兵赵国安
- 关键词：卡托普利心力衰竭细胞凋亡
- 红景天苷抑制动脉平滑肌细胞增殖、迁移、分泌表型的分子机制研究
- 2024年
- 探讨红景天苷(salidroside, SAL)抗血小板源性生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMC)表型转化,并对其药理机制进行探析。应用乳酸脱氢酶释放实验筛选SAL的安全有效浓度。应用PDGF-BB诱导HASMC建立细胞表型转化体外模型。分为对照组、模型组、SAL组。应用CCK-8法检测细胞增殖率,Transwell检测细胞迁移,荧光标记的鬼笔环肽对F-肌动蛋白(fibrous actin, F-actin)染色观察细胞骨架结构,Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、迁移相关蛋白基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)、表型转换标志物α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)。由结果可知造模使HASMC增殖明显、迁移增加并促使HASMC由收缩表型转变成分泌表型,使其细胞骨架结构排列紊乱。加入SAL后HASMC增殖、迁移能力减弱,“收缩表型标志物”α-SMA表达增加,“分泌表型标志物”OPN表达减少、细胞骨架结构排列紊乱改善。机制研究细胞信号相关通路Akt、mTOR,以及Akt/mTOR信号通路上下游相关蛋白磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue, PTEN)、血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor β,PDGFR-β)及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达。模型组HASMC信号通路Akt、mTOR蛋白磷酸增加,PTEN、HIF-1α、PDGFR-β相对表达量显著增高。SAL组磷酸化Akt、mTOR表达减少,PTEN、PDGFR-β、HIF-1α蛋白的表达降低。综上所述,SAL对PDGF-BB诱导的HASMC具有保护作用,可能与HASMC的PDGFR-β/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路相关。
- 张永杰闫志刚林飞刘慧兵赵国安
- 关键词：红景天苷细胞表型转化支架内再狭窄
- miR-133a介导Bcl-xl表达调节内皮细胞的凋亡被引量：2
- 2020年
- 目的microRNA-133a(miR-133a)参与动脉粥样硬化(AS)病理过程的具体机制不详。文中旨在探究miR-133a参与内皮细胞凋亡的调控过程。方法培养人冠状内皮细胞(HCAECs),分别给予不同浓度(5、15、25、50、75μg/mL)的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理12、24 h,MTT法检测细胞活力,筛选文献证实靶向调节抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2-特大型(Bcl-xl)的miRNA。转染细胞48 h后分为:无义序列组(无义序列NC)、过表达组(过表达miR-133a mimics)、沉默无义序列+诱导组(沉默无义序列in NC+ox-LDL诱导HCAECs)、miRNA沉默+诱导组(miR-133a敲减inhibitor+ox-LDL诱导HCAECs)。Western blot法检测抗凋亡蛋白Bcl-xl及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase3)表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用瞬时转染技术过表达及沉默miR-133a,观察其对靶基因Bcl-xl蛋白表达及内皮细胞凋亡的影响。结果MTT法检测显示,ox-LDL浓度25、50μg/mL的12、24 h细胞活力较0μg/mL降低(P<0.05);ox-LDL 75μg/mL的24 h细胞活力较0μg/mL明显降低(P<0.001)。过表达组细胞中miR-133a表达量(41.80±8.94)较无义序列组(1±0.31)明显增高(P<0.01),miRNA沉默+诱导组细胞中miR-133a表达量(0.20±0.11)较沉默无义序列+诱导组(1±0.11)显著降低(P<0.001)。流式细胞仪检测显示,ox-LDL 75μg/mL的细胞凋亡率[(28.97±3.20)%]较0μg/mL[(8.03±0.73)%]明显升高(P<0.01),miRNA沉默+诱导组细胞凋亡率(18.92±3.00)%]较沉默无义序列+诱导组[(27.1±2.01)%]明显降低(P<0.05),过表达组细胞凋亡率[(14.81±2.60)%]较无义序列组[(8.02±1.22)%]显著增加(P<0.05)。Western blot结果显示,随着ox-LDL浓度(25、50、75μg/mL)增加,抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达量逐渐降低,cleaved-caspase3的表达量增加。无义序列组Bcl-xl表达量(1.265±0.049)较过表达组(0.940±0.071)明显升高(P<0.05),沉默无义序列+诱导组(0.795±0.064)较miRNA沉默+诱导组(1.150±0.071)明显降低(P<0.05)。结论miR-133a靶向�
- 张永杰林飞闫志刚刘慧兵孙四玉王立波赵国安
- 关键词：内皮细胞凋亡动脉粥样硬化
- 大鼠急性一氧化碳中毒后心脏缝隙连接的重构被引量：1
- 2019年
- 目的探讨大鼠急性一氧化碳中毒(ACOP)后心脏缝隙连接的重构及心脏受损的机制。方法将40只青年雄性Wistar大鼠分成ACOP组、对照组,每组20只。采用腹腔内注射纯一氧化碳气体制备ACOP动物模型。2 h以后做心电图、采血及取材,分别检测血中碳氧血红蛋白(HbCO)水平;免疫组织化学(IHC)检测心肌组织缝隙连接蛋白43(Cx43)的分布;Western blot检测分析心肌组织总Cx43(T-Cx43)、磷酸化Cx43(P-Cx43)的水平;透射电镜观察心肌组织的超微结构。结果与对照组比较,ACOP组大鼠尾血中HbCO水平明显增高(P<0.05);心率明显减慢,心电图出现多种心律失常及心肌缺血改变(P<0.05)。IHC检测显示,ACOP组大鼠左心室心肌Cx43分布排列紊乱,端-端连接处表达减少,侧-侧连接处及细胞表面表达增加;Western blot检测显示ACOP组大鼠左心室心肌P-Cx43水平明显降低(P<0.05),而T-Cx43水平两组大鼠比较差异无统计学意义(P>0.05);电镜下显示ACOP组大鼠左心室心肌肌原纤维水肿,排列紊乱,闰盘显示结构模糊不清,部分闰盘融合消失。结论ACOP后大鼠心脏Cx43分布紊乱、磷酸化程度降低、缝隙连接超微结构受损,可能是ACOP后心律失常发生的解剖学基础。
- 王学惠李慧丹朱秀英刘慧兵张永春
- 关键词：急性一氧化碳中毒心脏
