刘雄
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- 人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证
- 2016年
- 目的建立人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白（anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG）双抗体夹心ELISA检测法,并进行验证。方法以兔抗猪Ig G包被酶标板,HRP酶标记的鼠抗猪Ig G为二抗,建立人血清中ALG含量的双抗体夹心ELISA检测法,并对方法中包被浓度及二抗浓度进行优化,同时验证该方法的重复性、敏感性、准确性、特异性及稳定性。采用优化后的方法对14位严重型再生障碍性贫血（severe aplastic anemia,SAA）患者进行ALG的血药浓度监测（therapeutic drug monitoring,TDM）。结果最佳包被浓度为1∶2 000,最佳二抗稀释度为1∶8 000。参考品浓度在4.9-5 000μg/ml范围内标准曲线的四参数Logistic曲线拟合较好,R2值为0.991 1,在4.9-156μg/ml范围内的线性拟合也较好,R^2值为0.991 5,批内重复性CV值均〈10%;其检测底限为0.39μg/ml;浓度为500、50及5μg/ml参考品的回收率为91.2%-107.0%;该方法可特异性检测出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃条件下分别保存1-3周及1-3 d后检测结果均较稳定。经DAS 3.1.4软件分析,14名经ALG治疗的SAA患者血清中ALG的曲线下面积（AOC）为（7.3±5.1）mg/（L·d）（95%CI）,半衰期（t1/2）为（20.65±38.67）d（95%CI）。结论该方法具有良好的重复性、准确度及稳定性,可用于ALG的TDM。
- 刘雄余健姚晶黄梦
- 关键词：酶联免疫吸附试验
