刘思佚
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天普研究基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乌司他丁对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及机制
- 2020年
- 目的阐明乌司他丁(UTI)对炎症状态下血管内皮屏障功能的影响及具体分子机制。方法以人脐静脉内皮细胞系EA.hy926为研究对象,建立炎症细胞模型及RhoA过表达细胞模型,分别用UTI和TNF-α处理细胞,采用Transwell法、TEER法检测细胞通透性;Western Blot法及RT-PCR法检测Rho/ROCK信号通路相关关键分子(RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VEcadherin)的表达变化情况。结果与正常对照组相比,TNF-α作用后EA.hy926细胞电阻值明显降低,细胞通透性显著升高,差异具有统计学意义[(33.67±4.04)Ω/cm2 vs(67.17±3.81)Ω/cm2,t=10.435,P<0.01],细胞内RhoA、ROCK2、p-MYPT1的表达量明显增加,差异具有统计学意义(均P<0.05),VE-cadherin的表达量明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),而UTI可逆转上述变化情况;与UTI处理组相比,RhoA过表达细胞模型中RhoA、ROCK2及p-MYPT1的表达显著增高,VE-cadherin表达降低,细胞通透性增加,差异具有统计学意义(均P<0.05),而空载病毒组中上述分子的表达水平以及细胞通透性无明显变化,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论UTI能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的血管内皮细胞通透性增加,改善血管内皮屏障功能障碍。
- 刘疏柯刘思佚魏伏古妮娜张丹
- 关键词：乌司他丁炎症
- CHR抑制白假丝酵母菌生物被膜形成作用及机制探讨
- 2016年
- 目的：CGA47-66（chromofungin,CHR）是嗜铬粒蛋白A（chromograinin A,CGA）水解形成的生物活性多肽,已有研究证实其具有免疫调节和抗菌作用,本研究旨在进一步证实CHR抗白假丝酵母菌生物被膜形成的作用,探讨其作用机制。方法：根据CLSI-M27-A3参考方法检测CHR对浮游状态下白假丝酵母菌的最低抑菌浓度,菌落计数法及XTT比色法验证CHR是否具有抑制生物被膜形成的作用,并确定CHR对白假丝酵母菌的BIC50,通过菌落计数法和倒置显微镜证实CHR抗真菌粘附作用,并使用q RT-PCR检测粘附基因Hwp1的表达情况从而进一步验证其作用的分子机制。结果：CHR对浮游状态白假丝酵母菌的MIC值为10～20μmol/L,并证实CHR具有抗白假丝酵母菌生物被膜形成作用,BIC50值为80～160μmol/L,且具有浓度依赖性;q RT-PCR检测CHR下调C.albicans Hwp1基因的表达,160μmol/L CHR处理组相对Hwp1基因表达量通过2-△△Ct值计算为（0.089 5±0.036 0）,无处理组Hwp1基因的表达是CHR组的11.17倍,差异具有统计学意义（t=44.008,P=0.001）。结论：CHR具有抑制白假丝酵母菌生物被膜形成的作用,其机制可能与CHR减少白假丝酵母菌细胞的粘附有关。本研究为CHR在抗真菌材料方面的应用提供了理论基础。
- 张舒许珊张丹黄文祥魏伏刘思佚罗盛淑何琴李佳俊
- 关键词：白假丝酵母菌生物被膜形成
- 乌司他丁抑制脓毒症患者血清诱导的血管内皮细胞高通透性被引量：7
- 2017年
- 目的观察乌司他丁(UTI)对脓毒症休克患者血清诱导的人脐静脉血管内皮细胞高通透性的影响。方法 ELISA检测5例健康志愿者和5例脓毒症休克患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;分别以(10、100、1000)U/mL UTI、300μL脓毒症休克患者血清、22 ng/mL TNF-α作用于体外培养的EA.hy926人脐静脉内皮细胞,采用Transwell^(TM)法检测细胞通透性;跨上皮细胞电阻法(EVOM)检测单层细胞电阻;免疫荧光细胞化学染色法检测细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)形态及分布情况。结果与健康志愿者相比,脓毒症患者血清中TNF-α含量明显增高;脓毒症血清作用于EA.hy926单层细胞后,细胞电阻值明显降低,细胞通透性显著升高,F-actin重新分布,细胞内应力纤维增多,而UTI可改善EA.hy926细胞的上述变化。结论 UTI能够抑制脓毒症血清引起的EA.hy926细胞通透性增加,且呈现一定的剂量依赖性。
- 刘思佚魏伏罗丽许珊刘疏柯张丹
- 关键词：乌司他丁高通透性肿瘤坏死因子Α
- 乌司他丁对TNF-ɑ所致血管内皮高通透性的影响及其机制初探
- 目的 探讨乌司他丁对炎症介质下血管内皮细胞(EA.hy926 细胞)通透性的影响及血管内皮细胞F-actin和p-MYPT1 的变化.方法 (一)应用Transwell 小室法检测不同浓度UTI 对TNF-α 刺激下EA...
- 魏伏刘思佚张丹
- 嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR抑制LPS诱导的永生化脑微血管内皮细胞高通透性被引量：1
- 2018年
- 目的探讨嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR(chromofungin)对LPS所诱导的永生化人脑微血管内皮细胞高通透性的影响。方法分别用LPS、CHR、CGA4-16作用于人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC),用CCK8法检测不同浓度LPS刺激HBMEC细胞活力变化;EVOM法及Transwell小室法检测内皮细胞相对通透性;Western blot及RT-PCR法检测紧密连接蛋白(ZO-1和Claudin-5)的表达情况。结果与空白组相比,随着LPS浓度增加,HBMEC细胞的活性受到显著抑制(P<0.05)。随着LPS作用时间延长,其细胞内紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5的表达逐渐下调,6 h后蛋白表达量降到最低(P<0.05),12 h和24 h后其蛋白表达与6 h相比无明显差异。LPS作用下HBMEC单层细胞电阻值明显降低(t=-18.214,P<0.001),细胞通透性显著升高(t=6.083,P=0.004),ZO-1、Claudin-5的蛋白和mRNA表达明显下调(P<0.05),而CHR可显著改善上述变化。结论嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR能通过上调紧密连接相关蛋白的表达从而改善LPS所致的脑微血管内皮细胞高通透性。
- 刘思佚曾燕刘疏柯魏伏许珊张丹
- 关键词：人脑微血管内皮细胞高通透性
- 多肽bCAT通过下调白念珠菌HWP1基因表达抑制生物被膜的形成机制被引量：5
- 2017年
- 目的明确多肽bCAT抑制白念珠菌生物被膜形成能力,并探索其与黏附基因HWP1表达的关系。方法标准菌株白念珠菌ATCC10231和临床菌株作为研究对象,XTT法检测其生物被膜形成能力,bCAT抗浮游白念珠菌的MIC值以CLSI-M27-A3方法确定,XTT法及菌落计数检测bCAT抑制生物被膜形成作用,并计算代谢活性确定抑制50%生物被膜形成的MIC(BIC_(50)),bCAT减少白念珠菌的黏附作用经倒置显微镜下观察及菌落计数法检测,并采用RT-PCR通过2^(-ΔΔCt)法计算HWP1的表达量。统计方法为单因素方差分析,组内比较采用Dunnett T3检验。结果标准菌株及临床菌株均有较强生物被膜形成能力。bCAT抗浮游状态的白念珠菌MIC值为40~80μmol/L,BIC_(50)为80~160μmol/L;并且bCAT能减少白念珠菌的黏附作用,空白对照组菌落计数为(27 822.22±2 472.74)cfu,bCAT浓度为160、80、40、20、10μmol/L时的菌落个数分别为(5 355.55±1 264.03)cfu、(11 377.78±2 232.58)cfu、(17 488.89±1 136.27)cfu、(22 377.78±3 521.99)cfu、(26 044.44±1 329.57)cfu。组间差异具有统计学意义(F=147.018,P=0.001),组内比较发现160、80、40μmol/L处理组与不含bCAT时差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR发现160μmol/L处理组HWP1相对表达量为空白对照组的12.24%。结论 bCAT能有效抑制白念珠菌生物被膜形成,其机制可能与降低HWP1基因的表达从而减少白念珠菌的黏附有关。具有一定的临床前景。
- 许珊张舒张丹刘思佚刘梳柯
- 关键词：白念珠菌生物被膜形成嗜铬粒蛋白A
- 乌司他丁抑制肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞高通透性的机制研究被引量：1
- 2018年
- 目的探讨乌司他丁(UTI)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞通透性增高的影响及其主要分子机制。方法离体培养人脐静脉内皮细胞系EA.hy926,分别以UTI和TNF-α作用于EA.hy926,小室法测单层细胞通透性,免疫荧光法测磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶向亚基1(p-MYPT1)的表达;分别采用免疫细胞化学法、Western Blot法测与通透性相关的关键分子(RhoA、ROCK2、MYPT1、p-MYPT1及VE-cadherin)表达的变化情况。结果 TNF-α作用下EA.hy926单层细胞通透性增加,细胞内p-MYPT1的表达量较正常对照组明显增加,而UTI可改善EA.hy926细胞的上述变化情况;免疫细胞化学结果显示,与正常对照组比较,TNF-α作用下RhoA、ROCK2的表达明显增加,而UTI可抑制RhoA、ROCK2的高表达;Western Blot结果显示,与正常对照组比较,TNF-α作用下p-MYPT1、RhoA和ROCK2的表达明显增加,VE-cadherin的表达明显降低(均P<0.05),而UTI可抑制p-MYPT1、RhoA和ROCK2蛋白的高表达,增加VE-cadherin的表达。结论 UTI可能通过Rho/ROCK信号通路抑制TNF-α引起的EA.hy926细胞通透性增加。
- 刘思佚魏伏刘疏柯罗丽许珊张丹
- 关键词：高通透性乌司他丁肿瘤坏死因子-ΑRHO/ROCK信号通路
