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逆转录病毒介导的HO-1基因在尼洛替尼诱导K562／A02耐药细胞凋亡中的作用被引量：4: 2012年; 目的研究逆转录病毒介导的血红素加氧酶-1（HO-1）基因在尼洛替尼（Nilotinib，AMN107）诱导慢性髓性白血病（CML）耐药细胞凋亡中的作用。方法制备高病毒滴度的逆转录病毒载体pQCXIP-EGFP-HO-1，建立稳定转染HO-1基因的K562／A02细胞。采用RT-PCR鉴定K562／A02细胞中HO-1基因的表达。liT-PCR和Westernblot法检测AMN107作用24h后K562／A02细胞中HO-1mRNA和蛋白的表达，采用MTT法观察细胞增殖变化，通过实时荧光定量PCR（RQ-PCR）法检测bcr-abl融合基因的表达，通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布。结果成功构建重组逆转录病毒载体，并建立稳定转染HO-1基因的K562／A02细胞系；证实转基因组细胞HO-1mRNA显著表达。AMN107作用3组细胞后，转基因组细胞HO-1mRNA和蛋白的表达明显高于转空载体组和未转染组，差异有统计学意义（P〈0．05）；MTY法检测显示AMN107处理后细胞增殖受抑，而转基因组细胞存活率明显高于转空载体组和未转染组，差异有统计学意义（P〈0．05）；RQ-PCR法检测结果显示，10μmol／LAMN107抑制bcr-abl基因的表达，但转基因组的bcr-abl基因表达水平（Ct值18．15±0．18）高于转空载体组（20．32±0．20）和未转染组（20．51±0．21），差异有统计学意义（P〈0．05）；流式细胞术检测结果显示10ixmol／LAMN107作用24h后，转基因组、转空载体组、未转染组细胞凋亡率分别为（17．26±0．23）％、（39．47±0．17）％、（41．84±0．09）％，未加药转基因组、未加药未转染组细胞凋亡率分别为（3．74±0．03）％、（5．91±0．08）％；细胞周期分析结果显示经AMN107处理后，G0／G1期和S期细胞明显减少，细胞阻滞在G2／M期，而转基因细胞组细胞周期改变不如转空载体组、未转染组明显。结论AMN107可抑制CML耐药细胞增殖且诱导细胞凋亡，HO-1基因在CML耐药细胞凋亡过程中起保护作�; 陈珵王季石秦东杨远于艳艳方琴; 关键词：逆转录病毒载体尼洛替尼 K562/A02细胞

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秦东

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