丁筠
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- RIG-I蛋白2CARD结构域真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达定位被引量：3
- 2016年
- 目的构建RIG-I蛋白2CARD结构域真核表达载体及其在He La细胞中的表达定位。方法RIG-I是一种模式识别受体,它能够参与由MAVS介导的NF-κB天然抗病毒免疫反应。2CARD(Caspase activation and recruitment domain,CARD)结构域是视黄酸诱导基因-I(Retinoin acid inducible gene I,RIG-I)N端的2个串联重复的半胱天冬酶激活招募区,在病毒侵染细胞过程中,2CARD结构域发挥了识别并启动机体免疫应答的功能。本研究通过PCR获取2CARD片段酶切后,与p CMV-Myc载体连接后转染He La细胞,在He La细胞中表达,并应用Western Blot和免疫荧光进行鉴定。结果 2CARD基因在He La细胞中成功表达。结论本研究成功构建了p CMV-Myc-RIG-I-2CARD真核表达载体,通过将RIG-I分子中负责信号转导的2CARD在He La中表达,为研究病毒与RIG-I的互作关系奠定一定的基础。
- 张丽丽杨琦闫江翠张雅婷陈宁丁筠邹德华李兴志郑亮程丽鑫张华曹宏伟
- 关键词：RIG-I天然免疫质粒构建
- 核蛋白Sam68的原核表达及鉴定被引量：5
- 2017年
- 为了构建pGEX-4T-1-Sam68原核表达载体,表达并鉴定GST-Sam68融合蛋白,采用PCR扩增Sam68基因,插入pGEX-4T-1的Eco R I和Sal I位点,并转化Rosetta(DE3)大肠杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot验证蛋白表达,GST pull-down技术验证Sam68的结合活性。酶切和测序结果证实Sam68基因正确插入pGEX-4T-1载体中,载体能够在Rosetta(DE3)细胞中正确表达,且纯化的GST-Sam68蛋白具有与PI3K p85特异结合的活性,说明成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1-Sam68。
- 张华陈宁丁筠邹德华潘子夜李鹏飞李丽阳肖丽杰曹宏伟
- 关键词：原核表达
