王建斌
- 作品数:10 被引量:13H指数:2
- 供职机构:中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金云南省应用基础研究基金云南省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 人二倍体细胞对不同病毒感染过程的生物学效应比较分析被引量:2
- 2016年
- 目的分析人二倍体细胞对不同病毒感染的生物学反应差异性及相关分子生物学机制。方法用人类肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和人单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染人二倍体细胞,光镜和电镜下观察感染细胞形态学特征;比较两种病毒在人二倍体细胞上的增殖动力学及两种病毒感染后细胞酶谱的变化;采用基因芯片检测两种病毒感染后人二倍体细胞基因反应的差异。结果感染细胞的光镜或电镜的超微结构观察均表现出许多相同的特点,包括细胞变圆、肿胀、折光性增强,以及细胞细微结构的受损,大多数细胞器的破坏等。两种病毒在人二倍体细胞上具有不同滴度峰值的增殖动力学过程;对细胞超氧化物歧化酶的动力学改变趋势有不同影响,但对乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶动力学变化趋势无明显影响;两种病毒感染引起人二倍体细胞出现不同的基因反应,其中与信号转导及与天然免疫反应有关的mRNA转录效率具有一定的差异。结论人二倍体细胞对EV71、HSV-1感染过程表现不同的生物学效应。
- 王辉张莹刘龙丁廖芸王建斌胡雅洁王丽春赵婷王艳翠李琦涵
- 关键词:二倍体细胞肠道病毒71型单纯疱疹病毒1型酶谱
- 体外研究脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应系统的作用及其免疫学意义
- 2019年
- 尽管针对脊髓灰质炎病毒已经有长达数百年的研究并成功研制出了预防性疫苗,但是对于该病毒如何启动机体天然免疫反应,进而激活获得性免疫反应这一过程的具体分子机理仍有诸多空白。本研究通过体外分析脊髓灰质炎病毒Sabin减毒株Ⅰ型的结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应信号分子的影响,了解脊髓灰质炎病毒在上皮细胞中启动免疫信号的具体分子机制。采用PCR方法扩增脊髓灰质炎病毒四种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4,经酶切纯化后与pcDNA3.1+真核表达载体连接,分别构建含目的基因的四种重组质粒。将重组质粒分别转染至人呼吸道上皮细胞16HBE中,48h后收集培养上清、细胞。提取细胞的总RNA,利用Q-PCR法分别检测四种结构蛋白表达所诱导的天然免疫信号分子的mRNA表达量。同时,上清、细胞裂解物分别与人T细胞共培养,检测其对T细胞增殖的影响。体外在16HBE细胞中分别表达SabinⅠ病毒VP1~VP4四种结构蛋白均可刺激如LTα3、NIK等NF-κB天然免疫信号通路相关分子的表达,并且表达这四种蛋白的细胞裂解物与T细胞共培养后均表现出刺激T细胞非特异性增殖的效应。但是,仅有VP1、VP2表达所诱导分泌相关因子的培养上清才表现出间接刺激T细胞增殖的能力。SabinⅠ毒株的四种结构蛋白可激活NF-κB信号通路,促进T细胞的非特异性增殖,从而激活适应性免疫应答。
- 吴化叶牟唐维王建斌柳蕾程继帅冯敏王丽春张莹李琦涵
- 关键词:脊髓灰质炎结构蛋白
- 柯萨奇病毒B组2型(CVB2)病毒蛋白转染上皮细胞后诱导的免疫应答信号分子的特征分析
- 2019年
- 目的分析柯萨奇病毒B组2型(coxsackievirus B2,CVB2)病毒蛋白转染上皮细胞后诱导的免疫应答信号分子特征。方法构建CVB2结构蛋白重组真核表达质粒转染16HBE细胞,收集转染后的16HBE细胞培养上清和裂解物。利用RT-Q-PCR技术检测转染后的16HBE细胞中与固有免疫应答相关的信号分子的mRNA表达水平。利用ELISPOT检测转染后的16HBE细胞上清和裂解物与T细胞共培养后该T细胞的增殖效应。结果CVB2结构蛋白VP1~VP4转染16HBE细胞后与固有免疫相关的信号分子如TAK、NIK、IKKα、IFN-β等基因表达量均发生了不同程度的上调;CVB2 VP1~VP4转染后的16HBE细胞上清和裂解物与T细胞共培养发现,均能刺激T细胞增殖。结论CVB2结构蛋白VP1~VP4可以不同程度地激活与固有免疫相关信号分子的表达,并且对适应性免疫的激活具有促进作用。
- 牟唐维吴化叶柳蕾王建斌张莹李琦涵
- 关键词:结构蛋白免疫应答
- 人未成熟朗格汉斯细胞的分选及鉴定
- 2018年
- 目的分离并鉴定健康人皮肤组织内未成熟状态的朗格汉斯细胞(LC)。方法把取得的人包皮组织剪成特定大小后采用分散酶Ⅰ(dispaseⅠ)消化过夜,分离表皮和真皮;Ⅰ型胶原蛋白酶在37℃消化表皮组织2 h并结合摇床振荡制成单细胞悬液,通过特异性的分子标志物,应用流式细胞仪分选获得人CD3^-CD14^-CD1a^+CD45^+LC,采用免疫荧光技术检测CD207的表达对其进行鉴定,并用台盼蓝染色检测其活力。结果分选得到未成熟LC,纯度为91. 31%,平均存活率为93. 16%。结论成功分选获得活力好、纯度高的未成熟人LC。
- 王建斌王丽春柳蕾吴化叶程继帅李琦涵
- 关键词:流式细胞仪
- 埃可病毒6型对恒河猴树突状细胞的感染研究
- 2019年
- 目的:肠道病毒作为小核糖核酸病毒的成员之一,其病原特性已得到了广泛的研究,为进一步探讨其尚未完全清楚的病理学机理,利用来源于恒河猴的不同免疫细胞,对埃可病毒6型(Echovirus 6,Echo 6)毒株与树突状细胞的作用关系及其特征做了初步分析。方法:利用流式细胞仪及抗不同树突状细胞表面特征分子的抗体,从恒河猴外周血及骨髓分离未成熟树突状细胞,经体外诱导培养后,以Echo 6病毒在感染复数为0.1的条件下感染树突状细胞,并于感染后不同时间点收集细胞,检测病毒载量,绘制病毒增殖曲线,同时对上清中相关细胞因子含量做出动态检测。结果:源于恒河猴外周血PBMC分选出的树突状细胞以成熟期树突状细胞(CD11^+/CD83^+)居多;而源于骨髓的细胞经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和重组人白细胞介素-4(recombinant human interleukin-4,rhIL-4)刺激培养后诱导分化的树突状细胞则以未成熟细胞为主。Echo 6型病毒分别对未成熟树突状细胞和成熟树突状细胞进行感染后显示,病毒在未成熟树突状细胞中有明显增殖的趋势而非在成熟树突状细胞中增殖。进一步检测病毒感染这些细胞后效应分子的表达情况发现,感染了Echo 6型病毒的未成熟树突状细胞出现肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)转录表达水平的明显上升,同时这些细胞的表面标记呈现CD11^+/CD83^+趋势。结论:Echo 6型病毒能够感染未成熟树突状细胞并在其中出现明显增殖趋势,并在上调细胞TNF-α和rh IL-6表达水平的同时,促进这些细胞转变为成熟树突状细胞。
- 曾洁媛杨盛然李琦涵王建斌王晶晶张小龙范胜涛冯敏廖芸王丽春蒋国润杨少杰余波张莹
- 关键词:树突状细胞肠道病毒肿瘤坏死因子白细胞介素-6
- 固有淋巴细胞研究进展被引量:5
- 2019年
- 固有淋巴细胞(innate lymphoid cells,ILCs)是一群新近发现的具有适应性免疫功能的固有免疫细胞,分化源于共同淋巴祖细胞(common lymphoid progenitor,CLP),存在于全身多个组织中。根据其分泌的细胞因子和表达的转录因子可以分为3个亚群:ILC1s、ILC2s和ILC3s,这些异质性免疫细胞群在机体不同组织中发挥着不同的作用,参与组织重塑、修复愈合,抗寄生虫、致病菌感染,并与肿瘤的发生、机体代谢的稳定以及共生菌免疫耐受的形成等有关。本文就ILC的分类、分化发育来源及最新功能研究进展做一综述。
- 王建斌李琦涵
- 关键词:分化发育
- 朗格汉斯细胞与病毒感染被引量:1
- 2018年
- 朗格汉斯细胞位于黏膜状组织和皮肤分层鳞状上皮,是高度专职的抗原呈递细胞家族成员,也是表皮中唯一的树突细胞。其作为一种皮肤免疫细胞,在摄取、加工处理和呈递抗原及诱导T细胞反应等方面发挥着巨大作用。机体皮肤或黏膜在遭遇不同病原微生物入侵时,朗格汉斯细胞与病原体的相互作用及引起后续免疫反应的机制存在差异。本文就朗格汉斯细胞的生物学功能及其在一些病毒感染中的作用进行综述。
- 王建斌李琦涵
- 关键词:朗格汉斯细胞抗原呈递细胞免疫反应病毒感染
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型经不同途径感染BALB/c小鼠的病理学研究被引量:2
- 2019年
- 目的观察并比较分析单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)经不同途径感染小鼠后的致病情况。方法将6周龄雌性BALB/c小鼠分为实验组和对照组。实验组小鼠分别经滴鼻、生殖道途径感染HSV-2(每只104CCID50/20 μl),对照组小鼠经上述两种途径注射PBS。感染后不同时间点,分别取肺、神经系统、生殖系统组织进行病理学观察及病毒载量检测。通过原位杂交对小鼠三叉和骶神经节中lat基因的表达进行定位,同时对组织中病毒进行重激活检测。结果两种途径感染HSV-2的小鼠体重在6 d后均呈下降趋势,且均能观察到组织病理损伤。鼻腔感染以肺泡壁充血、脑血管袖套、淋巴细胞浸润等肺部、中枢神经系统病理损伤为主;而生殖道感染组主要出现是骶神经节坏死、阴道和子宫嗜酸性粒细胞增多、卵巢充血等生殖道病理现象。经两种途径感染的小鼠组织器官中病毒载量的情况也印证了上述病理结果,即鼻腔感染组小鼠的神经、肺组织中病毒载量明显高于生殖道组,而生殖道感染组小鼠的生殖道和骶神经节中病毒增殖则明显高于鼻腔感染组。感染后28 d,在处于潜伏感染小鼠的三叉和骶神经节中均能检测到HSV-2 lat基因mRNA的阳性信号,并且采集的组织碎块均能在与Vero细胞共培养时使细胞病变,且生殖道感染组的lat基因阳性信号及重激活后病毒增殖趋势相对高于鼻腔感染组。结论HSV-2通过鼻腔和生殖道两种途径感染BALB/c小鼠均能引起组织病理损伤,且病理损伤空间特异性与感染途径密切相关。
- 曾洁媛李琦涵范胜涛廖芸冯敏徐兴丽沈冬王建斌程继帅张莹
- 关键词:生殖道感染病理学分析
- 单纯疱疹病毒2型衣壳支架蛋白ICP35原核表达载体的构建及其表达特性分析
- 2022年
- 本研究旨在构建单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)衣壳支架蛋白ICP35的原核表达载体,并分析其在HSV-2增殖中的表达特性。以HSV-2基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HSV-2 ICP35的编码基因UL26.5,并克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,将纯化的重组ICP35免疫家兔后获得抗体,采用免疫荧光检测ICP35在HSV-2增殖中的表达特性。结果显示,HSV-2 UL26.5基因的PCR产物大小约为1065 bp,原核表达重组蛋白的相对分子质量约为6.3×10^(4),免疫家兔的血清抗体可特异性识别HSV-2 ICP35。免疫荧光检测结果显示,HSV-2 ICP35可在感染后8 h出现于细胞核周围,12 h表达量进一步增加并向细胞核内聚集,16 h后在细胞核、细胞质内均可检测到聚集成斑点状的衣壳支架蛋白。结果表明,HSV-2 ICP35原核表达载体的成功构建及对其在HSV-2增殖中表达特性的分析,将为研究UL26.5基因的功能、蛋白相互作用、病毒与宿主的相互作用及筛选药物靶标等奠定基础。
- 王建斌李雪琦王丽春吴化叶程继帅牟唐维李琦涵
- 关键词:单纯疱疹病毒2型原核表达载体
- HSV1和HSV2对呼吸道及阴道上皮细胞的感染及其诱导的细胞内固有免疫应答信号分子表达特征分析被引量:3
- 2018年
- 目的 探讨1型和2型单纯疱疹病毒(HSV1和HSV2)感染对诱导呼吸道及生殖器上皮细胞中固有免疫信号分子表达的影响,以期初步了解单纯疱疹病毒原发性感染部位——上皮组织中的感染特征以及病理学特性.方法 利用光学显微镜及扫描电镜观察病毒感染人胚肺细胞KMB17及人阴道上皮VK2细胞后,细胞形态及内部结构的变化;采用蚀斑法和微孔细胞病变法,并结合实时定量PCR,检测病毒在两种细胞中的增殖情况;使用实时定量PCR方法分析病毒感染两种细胞后,诱导的固有免疫信号分子的表达情况.结果 HSV1和HSV2均能够感染KMB17及VK2细胞,并在12 h后出现明显的细胞病变及内部微结构破坏损伤的现象.两种病毒在两种细胞单层上均能够形成形态各异的蚀斑,但HSV2在KMB17细胞和VK2细胞上增殖速度慢于HSV1.两种病毒感染两种细胞后,诱导的固有免疫相关的信号分子表达特征有相应的差别.结论 HSV1和HSV2均能以动力学增殖模式感染呼吸道及阴道上皮细胞,两种病毒在两种细胞上的增殖特性稍有区别,但其诱导固有免疫应答信号分子的表达特征有显著差异.
- 廖芸廉亚茹李琦涵范胜涛柳蕾王建斌冯敏刘镓玮张莹
- 关键词:单纯疱疹病毒上皮细胞