罗琼
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：山东大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- FHIT基因表达对多西紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的实验研究
- 2009年
- 目的探讨外源性FHIT基因的表达对多西紫杉醇(DOC)诱导人胃癌细胞株(MGC-803)凋亡的影响及其分子机制。方法用脂质体将包含有外源性FHIT基因的重组真核表达质粒转染胃癌细胞MGC-803,获得稳定表达重组质粒pRcCMV-FHIT的细胞株(已由山东大学附属省立医院中心实验室成功构建),Western blot法检测外源性FHIT蛋白的表达;采用MTT法检测不同浓度(1.0、5.0、10.0、20.0、40.0 mg/L)及不同时间(24、48、72 h)下多西紫杉醇对MGC-803细胞的抑制率并选择最佳浓度和作用时间;采用流式细胞术检测FHIT转染和DOC单独及联合作用后的细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测干预前后cleaved-Caspase3的蛋白表达。结果获得稳定表达FHIT基因的胃癌细胞株;DOC对MGC-803细胞具有抑制作用,且浓度为20 mg/L、时间为48 h时最明显;DOC+pRcCMV-FHIT组细胞的凋亡水平(65.54%)较阴性对照组(3.27%)、pRcCMV组(3.55%)、pRcCMV-FHIT组(13.94%)、DOC组(44.13%)、DOC+pRcCMV(45.29%)组明显增高,且差异具有统计学意义(P<0.05);DOC+pRcCMV-FHIT组细胞的cleaved-Caspase3蛋白表达较其它各组明显增强。结论FHIT基因表达与DOC能够协同促进胃癌细胞的凋亡,这可能与二者能够协同上调Caspase-3蛋白表达相关。
- 李建华许洪伟张春清孔凡国罗琼
- 关键词：胃肿瘤脆性组氨酸三联体基因表达多西紫杉醇细胞凋亡
- shRNA-FHIT对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2010年
- 目的构建靶向抑制脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的短发夹双链RNA(shRNA)真核表达质粒,观察FHIT抑制后对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响。方法构建FHIT基因特异性的小RNA干扰质粒PGPU6/GFP/Neo-shRNA1、PGPU6/GFP/Neo-shRNA2,利用脂质体LipofactamineTM2000转染胃癌细胞BGC-823,实验分为未转染组、阴性对照组(转染PGPU6/GFP/Neo-shNC组)及PGPU6/GFP/Neo-shRNA1转染组和PGPU6/GFP/Neo-shRNA2转染组,G418筛选得到稳定表达株,Real-time PCR检测在mRNA水平干扰质粒对FHIT的抑制效应,MTT法、流式细胞术观察转染前后细胞生长特性的变化。结果与阴性对照组相比,转染shRNA-FHIT重组质粒的BGC-823细胞FHITmRNA表达明显下降(P<0.05)。与未转染组和阴性对照组相比,转染干扰质粒组细胞增殖活性增强,凋亡率减低、生长周期出现S期和G2/M期的比例上调(均P<0.05)。结论成功将重组shR-NA-FHIT表达载体转染BGC-823细胞,并筛选出稳定低表达FHIT的细胞。shRNA-FHIT可以促进胃癌细胞增殖、降低凋亡率,并削弱G0/G1期阻滞,为进一步研究FHIT基因在肿瘤中的作用机制奠定了实验基础。
- 罗琼许洪伟郝菁华刘慧朱强
- 关键词：胃肿瘤RNA干扰
