王海生
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：常州市武进中医医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 吡喃糖氧化酶的原核表达及初步实验应用被引量：1
- 2019年
- 目的原核表达、纯化、鉴定吡喃糖氧化酶(PROD),为其临床应用奠定基础。方法利用生物信息软件,比较不同种属的PROD核苷酸同源序列,优化设计PROD基因序列,委托上海捷瑞生物工程有限公司构建原核表达质粒pET15b-PROD,将此质粒导入大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。其超声后的沉淀、上清液经镍离子柱亲和层析纯化、脱盐后进行活性测定,并配成应用液检测50例(30例糖尿病患者,20例健康对照)血液标本中的葡萄糖水平,分析其与葡萄糖氧化酶法(GOD法)和已糖激酶法(HK法)检测血糖诊断糖尿病的效能。结果重组质粒pET15b-PROD经测序PROD基因序列长度为1 869bp,表达623个氨基酸。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示该蛋白在相对分子质量68×103处有一条明显的条带,该条带在超声后沉淀中很弱,而在上清中较浓。上清液经纯化后的纯度大于90%,活性超过60kU/g,用其测定空腹血糖并用于糖尿病诊断的受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积(AUC)为0.995,用GOD法和HK法的AUC分别为0.994、0.992。根据约登指数确定最佳临界点,上述3种方法分别为7.11、7.16、7.06mmol/L。结论本研究生产的PROD以上清液中的表达为主,其纯度优、活性强、产量高,可用于血糖的检测。在本研究的基础之上可进一步优化条件使之应用于临床标本中1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-AG)的检测。
- 王海生周亚萍于海燕郭素梅曹利民
- 关键词：原核表达糖尿病葡萄糖1,5-脱水葡萄糖醇
- 化学发光微粒子免疫分析法和酶联免疫吸附分析法检测癌胚抗原的效果
- 2018年
- 目的比较化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测癌胚抗原(CEA)的效果。方法分别采用CMIA和ELISA检测临床标本中CEA的水平,分析其灵敏度、检测范围、精密度、准确度及相关性。结果 CMIA法和ELISA法的灵敏度分别为0.5、1.8 ng/mL。CMIA法检测范围为0.5～1 336 ng/mL,ELISA法的检测范围为1.8～90 ng/mL。CMIA法高、中、低值混合血清的批内和批间精密度均小于5%,而ELISA法的均小于15%。CMIA法高、中、低的回收率分别为95.9%、103.1%、106.2%,平均为101.7%;ELISA法分别为93.8%、97.4%、94.6%,平均为95.3%。CMIA法和ELISA法检测CEA水平的线性回归方程为Y=0.9244X+3.1739(r=0.967,P<0.01)。结论 CMIA法检测CEA水平的灵敏度、检测范围、精密度及准确度均优于ELISA法,但ELISA法检测CEA的结果也能满足临床要求,适用于大批量体检标本检测。
- 王海生
- 关键词：化学发光微粒子免疫分析法癌胚抗原
- 咳喘颗粒剂对热型哮喘患儿外周血Th1/Th2细胞的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨咳喘颗粒剂对热型哮喘患儿外周血Th1/Th2细胞的作用。方法:48例热型哮喘患儿随机分为颗粒组和常规组,各24例;常规组口服中药咳喘颗粒剂,3次/d,3 d为1个疗程,治疗2个疗程;常规组采用常规西药治疗,布地奈德粉吸入剂(100μg/吸)和硫酸特布他林气雾剂(0.25 mg/喷),2次/d,治疗1周;另取20名健康儿童作为对照组。实时定量PCR检测各组外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中T细胞表达的T盒(T-box expressed in T cells,T-bet)mRNA和GATA连接蛋白3(GATA binding-3,GATA-3)mRNA的表达;ELISA法检测各组血浆IFN-γ和IL-4水平。结果:颗粒组和常规组总有效率分别为95.83%、91.67%,差异无统计学意义(χ2=0.559,P>0.05)。治疗前,颗粒组和常规组GATA-3 mRNA和IL-4水平明显高于对照组(P<0.01),T-bet mRNA和IFN-γ水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA和IFN-γ/IL-4明显低于对照组(P<0.01)。治疗后,3组GATA-3 mRNA、T-bet mRNA、IL-4、IFN-γ水平及T-bet mRNA/GATA-3 mRNA和IFN-γ/IL-4比值比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);但与治疗前相比,颗粒组和常规组GATA-3 mRNA和IL-4水平明显降低(P<0.01),T-bet mRNA/GATA-3 mRNA和IFN-γ/IL-4明显升高(P<0.01),T-bet mRNA和IFN-γ表达仅轻度增加(P>0.05)。结论:咳喘颗粒剂通过抑制Th2细胞,纠正Th1/Th2细胞平衡治疗患儿热型哮喘。
- 王海生王武强刘小林薛建华吴玉芳马梅香
- 关键词：TH1细胞TH2细胞
