王豪
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- microRNA-708-5p对骨肉瘤细胞凋亡与迁移的作用及机制被引量：1
- 2019年
- 该文主要研究microRNA-708-5p(miR-708-5p)在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞凋亡、迁移的影响及机制。该研究利用miRNA基因芯片筛选差异表达miRNA; qRT-PCR(quantitative Realtime PCR)检测miR-708-5p在骨肉瘤细胞株MG63和正常细胞hMSC、HS-5中的表达;通过阳离子脂质体介导法过表达miR-708-5p;分别用Hoechst 33258染色、流式细胞术、划痕实验、Transwell法检测凋亡和迁移;通过qRT-PCR检测miR-708-5p、ZEB1(Zinc?nger E-box binding homeobox 1)的RNA水平; Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达;利用TargetScan和双荧光素酶报告实验预测并验证miR-708-5p与ZEB1的靶向关系。结果显示, miR-708-5p在MG63中表达下调,恢复miR-708-5p表达水平可诱导MG63细胞凋亡并抑制迁移。Western blot结果显示,过表达miR-708-5p可上调E-cadherin,下调N-cadherin和ZEB1。双荧光素酶报告实验显示, miR-708-5p可直接靶向ZEB1。敲低ZEB1可抑制MG63迁移。该项研究结果表明, miR-708-5p可诱导骨肉瘤细胞凋亡,且通过靶向ZEB1来抑制迁移。
- 丰天宇朱中凯王豪毛筱涵刘丹袁仁杰刘跃华左国伟张明昊
- 关键词：骨肉瘤凋亡迁移
- SAHA与顺铂联合用药对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响被引量：3
- 2016年
- 该文研究了组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合顺铂(cisplatin,DDP)对骨肉瘤细胞的作用。骨肉瘤143B细胞分别经不同浓度的SAHA、DDP、SAHA+DDP作用48 h。利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;分别采用MTT法、流式细胞术、细胞划痕实验、克隆形成实验检测SAHA、DDP及二者联用对143B细胞活力、细胞凋亡、细胞迁移和集落形成能力的影响。利用Western blot检测143B细胞中cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP蛋白表达水平。结果显示,SAHA+DDP组143B细胞大量坏死,抑制细胞增殖的现象明显高于单药组;中低剂量SAHA与DDP联用表现为协同作用,而较高剂量的联用表现为单纯相加作用;SAHA+DDP组较单药组细胞早期凋亡率增加、迁移率明显降低,且SAHA+DDP组的细胞集落形成能力明显降低;SAHA+DDP组能够促进cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP的蛋白表达。以上结果表明,SAHA联合顺铂对骨肉瘤细胞143B细胞有协同增敏作用,能够明显抑制其增殖和迁移并促进其凋亡。
- 侯梦一姚娟王豪张章严树涓左国伟
- 关键词：SAHA顺铂骨肉瘤联合用药
- SAHA对骨肉瘤143B细胞的抑制作用及机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨伏立诺他(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对骨肉瘤细胞143B增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:以2~32μmol/L的SAHA作用于体外培养的143B细胞,采用MTT法检测SAHA对细胞活力的影响;选用SAHA作用的最适浓度和时间点进行后续的研究,并以加入最大剂量为1 ml/L的DMSO处理组作为空白对照。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平变化;real-time PCR检测细胞周期和凋亡相关基因Cyclin D1、Bax、Bcl-2以及组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)的基因表达;化学比色法检测143B细胞中HDACs活性的变化;荧光素酶报告基因筛选SAHA处理后细胞内可能激活的信号通路;Western blot检测143B细胞中Cyclin D1、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-PARP及AP1蛋白的表达水平。结果:SAHA在2~32μmol/L浓度范围内可以抑制143B细胞的增殖,并且呈时间和剂量依赖性,48 h引起143B细胞半数抑制的浓度约为8μmol/L。SAHA可将143B细胞周期阻滞在G0/G1期,并且可以引起细胞的早期凋亡及Cyclin D1、Bcl-2、HDAC1、HDAC3的m RNA表达量下调,Bax的m RNA表达量上调;SAHA处理143B细胞后可以降低细胞内HDACs的活性,促进细胞中转录因子AP1的表达,并且能够下调细胞中Cyclin D1、Bcl-2的蛋白表达,促进Bax、cleaved-Caspase-3、cleaved-PARP及AP1的蛋白表达。结论:SAHA可以通过抑制HDACs的活性,激活AP1信号通路从而诱导143B细胞的凋亡及周期阻滞。
- 姚娟翁亚光严树涓侯梦一靳雅倩王豪左国伟
- 关键词：骨肉瘤细胞周期凋亡组蛋白去乙酰化酶
- 人参皂苷Rg3抑制人骨肉瘤143B细胞的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡被引量：6
- 2020年
- 目的:探讨人参皂苷Rg3对骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法:用梯度浓度的Rg3(40、50、60、70和80μmol/L)处理143B细胞(以用DMSO处理143B细胞作为对照组)24、48和72 h,采用MTT法和克隆形成实验检测Rg3对143B细胞活力及增殖的影响,并计算Rg3对143B细胞的半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentration,IC50)值,筛选最适药物浓度和作用时间。Hoechst 33258染色法和FCM法分别检测Rg3对143B细胞凋亡及细胞周期的影响;细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测Rg3对细胞迁移和侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR法检测增殖标志物增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测增殖标志物PCNA、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和剪切型(cleaved)-Casepase 3,细胞迁移和侵袭相关标志基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-7的表达水平;最后,用荧光素酶基因报告系统筛选Rg3参与调控的信号通路;蛋白质印迹法检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)信号通路中相关蛋白蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)、CREB及其磷酸化蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,Rg3浓度为40、50、60、70和80μmol/L时均可以抑制143B细胞的增殖,且这种抑制作用与浓度和作用时间呈正相关(P值均<0.001),Rg3对143B细胞的IC50值为(51.00±3.46)μmol/L。Rg3能下调增殖标志分子PCNAmRNA和蛋白的表达水平(P值均<0.05)。另一方面,Rg3又可促进143B细胞的凋亡并抑制其迁移和侵袭(P值均<0.05)。Rg3处理后的143B细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下调(P<0.01),促凋亡蛋白Bax和cleaved-Caspase 3的表达水平上调(P值均<0.05);侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-7的表达水平下调(P值均<0.05);同时CREB转录活性下降(P值<0.001),CREB信号通路中AKT及CREB磷酸化水平均明显下降(P值均<0.05)。结论:R
- 毛筱涵靳雅倩丰天宇王豪刘丹袁仁杰武娟莫洲沛左国伟
- 关键词：骨肉瘤人参皂甙细胞增殖细胞运动
