左晓宇
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 陆地棉GDP-L-半乳糖磷酸化酶基因启动子的克隆及活性分析被引量：2
- 2016年
- 抗坏血酸(Ascorbic acid,As A)在植物发育和响应逆境胁迫过程中发挥着重要作用。GDP-L-半乳糖磷酸化酶(GDP-L galactose phosphorylase,GGPase)是As A合成过程中关键酶之一,在As A的生物合成和代谢调控中具有重要作用。为深入了解棉花Gh GGPase基因的表达调控模式,本研究利用PCR技术克隆得到Gh GGPase基因起始密码子上游2 464 bp的启动子序列,序列分析发现该启动子包含多个参与激素信号、光调节和抗逆信号应答的顺式作用元件。构建p Gh GGPase::GFP-GUS过量表达载体,采用农杆菌介导法瞬时转化烟草叶片,进行GUS组织化学染色和酶活性检测,GUS染色实验结果显示,瞬时转化启动子的烟草叶片表现出较深的蓝色,并且具有较高的酶活性表达,这表明Gh GGPase启动子能够显著的驱动GUS的表达。以上结果表明:Gh GGPase启动子是一个完整的功能序列,具有较强的表达活性。
- 左晓宇梁卓安晶潘泽李鸿彬
- 关键词：陆地棉启动子GUS
- 棉花GhGGPase2基因克隆、功能序列分析、原核表达及烟草的遗传转化被引量：1
- 2016年
- 以棉花纤维组织为材料,根据NCBI棉花EST进行同源搜索、比对和序列拼接,经RT-PCR从陆地棉纤维组织中扩增得到L-半乳糖磷酸化酶基因(Gh GGPase2)的c DNA开放阅读框为1 335 bp,为包含445个氨基酸的蛋白质,分子质量约为49 ku。利用软件进行蛋白质序列分析,Gh GGPase2蛋白具有组氨酸三聚体(HIT)蛋白超家族的主要特性的结构域。进化树分析的结果表明棉花Gh GGPase2与猕猴桃Ad GGPase在进化上亲缘关系上较近。构建原核表达载体p ET28a-Gh GGPase2并转化大肠杆菌,将重组载体p ET28a-Gh GGPase2导入大肠杆菌BL21(DE3)中通过IPTG诱导表达后经过SDS-PAGE分析,显示成功获得分子质量为49 ku左右的诱导表达蛋白Gh GGPase2。将Gh GGPase2基因构建到植物真核表达载体p CAMBIA2300中,利用农杆菌通过叶盘法转化烟草,经PCR分子鉴定,获得了含Gh GGPase2转基因烟草植株。研究结果将为进一步阐明该基因的生物学功能奠定基础。
- 禄亚洲尹秀左晓宇梁卓李鸿彬
- 关键词：棉花纤维原核表达克隆
