吴福仁
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：广西医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- CRISPR/Cas9介导的CD34报告基因293AD细胞系的构建被引量：4
- 2016年
- CRISPR/Cas9技术作为一项新起的基因工程技术,在细胞及动物模型基因的编辑修饰中起着越来越重要的角色。CRISPR相关Cas9核酸酶可在特殊设定的单一导向RNA(single guide RNA,sg RNA)的引导下造成基因组DNA双链断裂(DSBs),从而引起同源重组修复(HDR)。利用这种特性,我们构建出了带有CD34-GFP报告基因的293AD细胞系。根据CD34基因组序列,我们设计出了针对CD34基因特异性的单向导向RNA(sg RNA)和带有CD34-GFP报告基因的外源性同源序列。在与Cas9共转染之后,利用嘌呤霉素筛选出基因组DNA中插入有CD34-GFP报告基因的293AD细胞。之后我们对筛选出的293AD细胞进行单细胞分选,并利用PCR扩增对CD34绿色荧光报告基因的插入进行了验证。最后,我们将PCR扩增结果阳性的单克隆293AD细胞系的基因组进行DNA测序。DNA测序结果显示,分选出来的细胞基因组里确实包含有CD34-GFP报告基因。最终,我们成功利用CRISPR/Cas9系统构建出了绿色荧光标记的CD34报告基因293AD细胞系,为后续人体细胞诱导去分化成造血干细胞提供了有利的工具。
- 吴福仁康雪晴庄园吕智略郑顺心周素芳
- 关键词：报告基因同源重组
- 载体pAAVeG-sgRNa-供体DNA的构建及与CRISPR/Cas9共同介导的基因编辑
- 目的: 构建AAV表达载体pAAVeG-U6gRNA，并根据不同的受体细胞设计不同的基因编辑模型来验证新构建载体与CRISPR/Cas9共同介导基因编辑的能力。 方法: 首先通过基因克隆的方法，将原始的真核表达载体...
- 吴福仁
- 关键词：腺相关病毒同源重组受体细胞
- 文献传递
