高杰
- 作品数：21 被引量：20H指数：3
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
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- 红细胞膜相关蛋白通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中Th17细胞分化
- 2023年
- 目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方法流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠。流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响。40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况。40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP^(+/+)和ERMAP^(-/-)组,每组20只。记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分。流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、ROR-γt蛋白水平表达;Real-time PCR检测IL-17、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-α的表达。结果1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状。2.与对照组相比,ERMAP^(-/-)组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加。3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Th17细胞分化,参与小鼠EAE发生发展。
- 何可可李远迪文廷浩朱婕高杰高杰韩锋胡蓉
- 关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠
- Pax6和Wnt7a在小鼠角膜中的表达分析被引量：1
- 2020年
- 目的观察Pax6和Wnt7a在小鼠角膜中的表达及分布情况,探讨Pax6和Wnt7a在角膜中的关系。方法对小鼠与人、家兔、恒河猿的Pax6和Wnt7a氨基酸序列同源性进行生物信息学分析;石蜡切片法观察小鼠眼球壁的形态结构;免疫组织化学技术和流式细胞术分别检测Pax6和Wnt7a在小鼠角膜中的分布和表达。结果小鼠和人、家兔、恒河猿的Pax6和Wnt7a蛋白氨基酸序列同源性都超过90%,其中小鼠和人的同源性最高。HE染色显示了正常小鼠的眼球壁结构。Pax6的免疫阳性表达在小鼠角膜全层的细胞质和细胞膜上,阳性表达率约为77.84%;Wnt7a的免疫阳性主要表达在小鼠角膜全层的细胞膜上,阳性表达率约为63.51%。结论Pax6和Wnt7a均在小鼠角膜中高表达,可能参与角膜的形成。
- 高杰穆尧向松丁玲胡蓉李红苏敏
- 关键词：PAX6角膜小鼠石蜡切片法免疫组织化学技术流式细胞术
- 内皮型一氧化氮合酶过表达对慢性低氧诱导小鼠肺动脉高压的作用被引量：4
- 2020年
- 目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNos)基因体内转染对小鼠慢性低氧性肺动脉高压(PAH)的作用。方法将36只雄性清洁级昆明小鼠随机分为对照组、模型组和eNos治疗组,每组12只。采用间断性常压缺氧法建立小鼠慢性低氧性PAH的模型。观察4周后,将PEI/重组质粒复合物经尾静脉注射到eNos治疗组小鼠体内,其他2组注射等量生理盐水,继续低氧处理。转基因治疗30 d后,观察小鼠的一般情况、平均肺动脉压、右心室肥大指数及肺小动脉形态变化;采用RT-PCR方法检测外源荧光蛋白DsRed表达情况;采用Real-time PCR法检测各组肺组织eNos mRNA的表达;采用硝酸还原酶法检测各组小鼠肺组织NO含量。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠的右心室肥大指数及平均肺动脉压较高,肺小动脉管壁厚度增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组小鼠相比,eNos治疗组小鼠的平均肺动脉压及右心室肥大指数增高减轻,肺小动脉管壁增厚减轻,差异有统计学意义(P<0.05);eNos治疗组小鼠肺组织中可见外源性基因DsRed表达,eNos mRNA表达量和NO含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性eNos基因体内转染能够改善慢性低氧诱导小鼠PAH模型的肺血管重构,使右心室肥大指数增高减轻,肺小动脉血管增厚减轻。
- 高杰兰江胡蓉李红黄悦苏敏
- 关键词：内皮型一氧化氮合酶肺动脉高压聚乙烯亚胺一氧化氮
- Pax6基因在小鼠骨髓间充质干细胞中的过表达
- 2019年
- 目的体外研究Pax6基因在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达情况。方法利用全骨髓贴壁法体外分离培养小鼠BMSCs,将包装成功的Pax6慢病毒表达颗粒感染BMSCs,经G418梯度及荧光蛋白双筛选后,使用细胞免疫荧光染色、蛋白印迹技术及反转录PCR(RT-PCR)技术检测Pax6的表达情况,流式细胞术检测Pax6/BMSCs阳性细胞的比例。结果 Pax6成功在BMSCs内过表达,流式结果显示Pax6阳性率超过90%。结论建立Pax6稳定表达的细胞株Pax6/BMSCs可为下一步其在眼表组织工程方面的研究奠定基础。
- 方可心丁玲辛颖马静怡李倩高杰
- 关键词：PAX6骨髓间充质干细胞流式细胞术
- 神经生长因子对体外培养角膜缘干细胞的作用
- 2017年
- 目的探讨神经生长因子(NGF)对体外培养角膜缘干细胞(LSCs)的影响及其受体在LSCs上的表达与细胞增殖的关系。方法体外培养LSCs,分对照组和NGF组传代培养,分别选取各组培养1 d、3 d和5 d的细胞,免疫细胞化学检测p63、TrkA、p75表达。结果 NGF组在1 d、3 d、5 d时间点p63表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NGF组各时间点TrkA表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。NGF组各时间点p75表达平均灰度值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析TrkA表达平均灰度值与p63表达平均灰度值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NGF有维持LSCs的干细胞特性的作用,LSCs可表达NGF受体TrkA和p75,且TrkA的表达与LSCs的增殖有相关性。
- 高杰刘强胡蓉黄悦苏敏李红
- 关键词：神经生长因子P63TRKP75
- β-神经生长因子基因克隆和诱导表达及其对PC12细胞的诱导分化作用被引量：5
- 2016年
- 目的构建β-神经生长因子(β-NGF)慢病毒表达载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF,应用Tet-on 3G四环素诱导表达系统,探讨β-NGF在人胚肾(HEK293FT)细胞中的过表达情况,及其对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞分化的影响。方法从SD大鼠脑组织提取总RNA,反转录成c DNA,利用分子生物学技术,克隆鼠β-NGF基因完整编码区,将β-NGF基因定向插入载体p LVX-TRE3G-IRES中。将重组载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF和载体p LVX-Tet3G分别转染空白HEK293FT细胞,制备收获慢病毒,共转染HEK293FT细胞,同时用不同剂量强力霉素(Dox)诱导NGF表达(分为未转染组、0、100、500和1000μg/L Dox诱导表达组)。48h后收集细胞,免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞内β-NGF表达情况。同时收集培养上清,1.ELISA检测各组上清内β-NGF的分泌量;2.制作条件培养基,加入PC12细胞培养基中进行诱导培养,观察PC12细胞诱导分化情况。结果双酶切和测序鉴定重组质粒p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF序列和方向正确;β-NGF在转染细胞内被诱导表达,随着Dox剂量增加,表达量增强;β-NGF在培养基的上清内表达,表达量随Dox剂量增加而增多。诱导表达的条件培养基可诱导PC12细胞形态改变,表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)蛋白。结论成功重组慢病毒载体p LVX-TRE3G-IRES-β-NGF,转染后β-NGF基因能够在HEK293FT细胞中表达和分泌,且该蛋白具有诱导PC12细胞向神经元样细胞分化的能力;运用Tet-On 3G四环素诱导表达系统,可成功诱导表达获得不同剂量β-NGF蛋白。
- 高杰严会文李红黄悦胡蓉苏敏
- 关键词：Β-神经生长因子PC12细胞强力霉素酶联免疫吸附法免疫印迹法
- β-NGF基因克隆和诱导表达及其对角膜缘干细胞的作用
- 目的：构建含有神经生长因子（β-NGF）慢病毒表达载体pLVX-TRE3G-IRES-β-NGF，使用Tet-on3G四环素诱导表达系统，研究不同剂量强力霉素（Dox）诱导β-NGF基因表达对体外培养角膜缘干细胞（LSC...
- 高杰
- 关键词：神经生长因子基因克隆强力霉素角膜缘干细胞细胞增殖
- PAX6通过PI3K/AKT信号通路抑制mESCs增殖的研究被引量：1
- 2019年
- 目的探讨PAX6对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)增殖的影响及其机制。方法用过表达PAX6慢病毒重组质粒载体感染mESCs,上调mESCs中PAX6的表达;采用CCK8检测PAX6对mESCs增殖的影响;采用流式细胞仪检测PAX6对mESCs周期的影响;采用葡萄糖生化试剂盒和ATP检测试剂盒分别检测mESCs葡萄糖和ATP含量;Western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-P70S6K、P70S6K、GLUT1的表达。结果慢病毒重组质粒载体感染后,PAX6过表达组mESCs较对照组PAX6表达增加,细胞增殖受到抑制,并出现G1期阻滞(二倍体含量百分率55.54±1.00%vs 41.12±0.63%,P<0.05);与对照组比较,PAX6过表达减少mESCs中ATP(277.7±14.3 vs 804.4±13.4 umol/gprot,P<0.05)及葡萄糖含量(2.55±0.16 vs 5.16±0.15 mmol/L,P<0.05);与对照组相比,PAX6过表达组、PAX6过表达+BKM120组和BKM120组的p-PI3K,p-AKT,p-P70S6K,GLUT1蛋白表达量显著降低。结论 PAX6可通过抑制PI3K/AKT信号通路的活性,减少mESCs中的ATP及葡萄糖含量,从而抑制mESCs的增殖。
- 王姣胡蓉高杰丁玲李红苏敏
- 关键词：PAX6PI3K/AKT胚胎干细胞增殖
- 骨髓间充质干细胞通过抑制T细胞功能改善EAE
- ＜正＞本研究拟在观察骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）移植治疗实验性过敏性脑脊髓炎（EAE）效果的同时,从免疫调节方面去探讨BM-MSCs移植治疗EAE的相关机制。全骨髓贴壁法分离培养小鼠BM-MSCs,取正常小鼠脾脏制...
- 辛颖高杰苏敏胡蓉马静怡余佳珊
- 文献传递
- Wnt信号通路与自身免疫调节因子共同参与胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化
- 2024年
- 背景:自身免疫调节因子(autoimmune regulator gene,Aire)及Wnt信号通路在小鼠胚胎干细胞多能性的维持及分化中都发挥着重要作用,但Wnt信号与Aire是否参与了小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞的分化尚未可知。目的:探讨Wnt信号通路和自身免疫调节因子与胚胎干细胞分化的关系。方法:采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,然后用Aire shRNA慢病毒感染小鼠胚胎干细胞,嘌呤霉素筛选单克隆稳定株,再采用两步分化方法进行诱导分化,分别于定向诱导分化第0,3,10天,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time qPCR检测相关基因及蛋白的表达变化。结果与结论:①定向诱导分化第0天,免疫荧光染色显示SSEA1、OCT4表达呈阳性;②定向诱导分化第3天,免疫荧光染色显示SOX17、FOXA2表达呈双阳性;③定向诱导分化第10天,流式细胞术结果显示EPCAM1、K5、K8表达呈阳性;④与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达升高,Aire蛋白表达降低;⑤与未分化的小鼠胚胎干细胞相比,诱导分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β及Aire mRNA表达升高;⑥与正常培养的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞相比,敲低Aire基因的小鼠胚胎干细胞及其最终分化的胸腺上皮祖细胞中Wnt7a、β-catenin、Gsk-3β蛋白表达水平降低。综上所述,Wnt信号通路和Aire共同参与了小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为小鼠胸腺上皮祖细胞的过程。
- 文廷浩李远迪何可可宋雯茜王先斌高杰高杰胡蓉
- 关键词：WNT信号通路自身免疫调节因子胚胎干细胞
