曹新文
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 橡胶草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A基因表达的初步分析被引量：1
- 2017年
- 分析橡胶草HMGR基因的表达情况,构建原核表达载体,转化BL21菌株并诱导表达。构建细胞融合表达载体,转化GV3101菌株并侵染洋葱表皮细胞,在共聚焦显微镜下观察基因表达情况。构建植物过表达载体并侵染烟草,利用紫外分光光度法检测三萜含量的变化。通过IPTG诱导和SDS-PAGE检测,获得分子量为62.659 1 ku的蛋白,与预期蛋白相符合,且37℃诱导6 h时表达最明显;通过激光共聚焦显微镜观察,该基因主要在细胞膜上表达;紫外可见分光光度法表明转基因烟草中三萜的含量高于空白烟草。橡胶草HMGR基因分别在大肠杆菌、洋葱鳞片内表皮和烟草中成功表达。
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- 关键词：橡胶草原核表达亚细胞定位
- 橡胶草高效再生体系的建立和优化被引量：2
- 2016年
- [目的]优化橡胶草再生和遗传转化体系。[方法]以橡胶草茎和叶为外植体,以1/2MS和MS为基本培养基,研究不同激素浓度配比、外植体类型和激素浓度对橡胶草不定芽诱导和生根的影响。[结果]橡胶草进行组织培养的最佳外植体类型为茎,诱导不定芽形成的最佳激素浓度配比为1.0 mg/L 6-BA和0.10 mg/L NAA。诱导不定芽生根的最佳激素浓度为0.10 mg/L NAA,生根率达100%,移栽成活率达95%以上。[结论]建立了橡胶草高效再生体系,对提高橡胶草组织培养的效率和转化率具有重要意义。
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- 关键词：橡胶草
- 橡胶草TkDREB2基因的克隆以及在烟草中的抗旱功能分析被引量：2
- 2021年
- 为探究茉莉酸在提高植物抗旱性方面发挥的重要作用。对橡胶草外施茉莉酸甲酯(MeJA)处理的转录组进行差异表达谱分析,并筛选克隆出一个受茉莉酸诱导表达显著上调的AP2/EREBP亚家族基因DREB,命名为TkDREB2,对其进行生物信息学分析并转化烟草,进一步对TkDREB2转基因烟草植株在发育期的抗旱性功能鉴定,对转基因烟草进行自然干旱处理,并测定相关生理指标。结果显示在茉莉酸甲酯处理的转录组分析中发现与茉莉酸合成相关的基因和转录因子AP2/EREBP、MYB、MYC、NAC和WRKY的表达水平发生显著变化。筛选克隆的TkDREB2基因全长CDS序列为1002 bp,编码333个氨基酸,属于AP2/EREBP亚家族的DREB型转录因子;系统进化树分析表明,该蛋白与苜蓿的DREB蛋白同源性最近。对转基因烟草进行自然干旱处理15 d后发现野生型叶片开始萎蔫;继续处理至22 d,野生型叶片严重萎蔫而转基因烟草仅轻微萎蔫,测定正常生长及干旱处理后野生型和转基因烟草的相关生理指标发现:在正常生长条件下,转基因烟草的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性大约是野生型的2倍;在干旱处理后,转基因烟草的CAT、SOD和POD活性分别是野生型的2倍、2倍和1.5倍左右,丙二醛(MDA)含量和相对电导率仅是野生型的1/2左右。综合以上结果表明TkDREB2能够积极响应茉莉酸的诱导表达,过表达TkDREB2基因能够明显提高烟草的抗旱性,推测DREB2转录因子可能在茉莉酸信号转导调控植物抗旱性方面发挥重要作用。
- 张云川林熠轩曹新文王海楠闫洁
- 关键词：转录组转录因子烟草抗旱性
- 橡胶草法尼基焦磷酸合酶基因的克隆与功能分析被引量：10
- 2016年
- 【目的】法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)是天然橡胶生物合成的甲羟戊酸途径中的关键酶,获得橡胶草FPS基因并转化野生橡胶草,为研究FPS基因在橡胶草橡胶生物合成过程中的调控作用奠定基础。【方法】采用同源克隆的方法获得橡胶草FPS基因全长c DNA序列,并对该基因进行生物信息学分析。对橡胶草和其他18种不同高等植物的FPS氨基酸序列进行多序列比对及进化树分析。提取橡胶草不同组织:根、叶柄、叶、花梗、花和种子RNA,对FPS基因进行组织特异性表达分析,并对不同生长时期的橡胶草FPS表达量进行比较,分析橡胶草生长过程中FPS的调节作用。将该基因在野生型橡胶草中过表达,对得到的转基因和野生型植株FPS相对表达水平进行分析,比较转基因和野生型植株橡胶含量的变化。碱煮法提取转基因和野生型橡胶草根部的橡胶,测定橡胶含量。【结果】获得橡胶草FPS基因全长c DNA序列,命名为TKFPS(Gen Bank登录号KJ558350.1)。序列分析表明该基因包含1个1 029 bp的完整开放阅读框,编码342个氨基酸,编码的蛋白质相对分子量为39.35 k D,理论等电点(p I)为5.41,平均疏水性为-0.242。多序列比对结果表明,橡胶草FPS氨基酸序列含有高等植物FPS基因的5个保守结构域,系统发育分析结果显示新疆野生橡胶草与蒲公英处于同一分支,其亲缘关系最近。TMHMM和Target P亚细胞定位分析得知,TKFPS蛋白无跨膜区域,可能定位于细胞质中发挥功能。组织特异性分析结果表明TKFPS在橡胶草的根、叶柄、叶、花梗、花、种子中均有表达,其中,在叶中表达量最高,根次之,在花中表达量最低。重组子p CAMBIA2300-35S-TKFPS经农杆菌介导法转化野生橡胶草叶盘,得到6株转基因植株。实时荧光定量PCR检测发现,与野生型相比,转基因株系FPS的相对表达量水平明显升高,6株转基因株系TKFPS表达量平均�
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- 关键词：橡胶草生物信息学REAL-TIMEPCR
- 茉莉酸甲酯对橡胶草生理生化及乳管分化的影响被引量：9
- 2017年
- 为了研究喷施不同浓度茉莉酸甲酯(MeJA)对橡胶草(Taraxacum kok-saghyz Rodin,TKS)农艺性状和乳管分化相关生理生化指标的影响,分析这些指标的变化与乳管分化的关系,明确促进橡胶草乳管分化的最佳MeJA喷施浓度,本试验选择1个月生的盆栽橡胶草为材料,设5个浓度的MeJA处理水平,即0.25、0.50、1.00、2.00和5.00 mmol/L,以喷施含2.2%无水乙醇的蒸馏水处理的橡胶草为对照,研究喷施不同浓度MeJA对橡胶草农艺形状、叶片叶绿素含量、根系活力、根系内源激素含量、根系PAL活性、根系木质素含量及根部韧皮束圈数的影响。结果显示:与对照相比,喷施不同浓度MeJA可增加橡胶草的主根长度、主根粗度和根冠比,但抑制了叶片的生长。喷施不同浓度MeJA提高了叶片叶绿素含量和根系活力;橡胶草根系内源玉米素核甘(ZR)、生长素(IAA)和MeJA含量均呈增加趋势,且均大于对照处理;随着MeJA处理浓度的增大,脱落酸(ABA)和赤霉素(GA3)含量呈先增加后减小的趋势;6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)含量与对照无显著差异。适宜浓度MeJA可增加橡胶草根部苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,提高根系木质素含量,增加韧皮束圈数。经0.25、0.50和1.00 mmol/L MeJA处理后植株韧皮束圈数与对照呈显著差异,与对照相比分别增加了29.4%、35.3%和47.0%。喷施适宜浓度的MeJA可促进根部的生长,优化地上部与地下部的关系;加速根部IAA、MeJA、GA3、ZR和ABA代谢;提高植株PAL活性,增加木质素含量,提高乳管分化能力。因此,可以通过叶面喷施浓度为1.00 mmol/L的MeJA最大限度的促进橡胶草根部乳管分化。
- 马海霞何丽娜海春燕曹新文雷骥良闫洁祝建波
- 关键词：橡胶草乳管分化
- 能源橡胶草GGPPS基因启动子的克隆及瞬时表达研究被引量：4
- 2016年
- 以多年生宿根型草本植物橡胶草为材料,根据已获得的橡胶草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPPS)基因序列设计引物,采用TAIL-PCR扩增到GGPPS基因5′上游大小为1131bp的序列。采用PlantCare和PLACE软件分析,表明该序列不仅具有启动子的基本元件,同时还有与多个器官特异表达元件以及与胁迫相关的顺式作用元件,命名为pTkGGPPS(GenBank:KT901796)。将该序列代替pCAMBIA1304质粒上的CaMV 35S启动子序列,以GFP基因作为报告基因,构建pCAMBIA1304-pTkGGPPS-GFP植物表达载体,利用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,结果表明,该启动子能够驱动GFP基因表达,具有一定的活性。TkGGPPS基因启动子克隆及瞬时表达为橡胶草中橡胶合成及组织特异性研究奠定了基础。
- 李永梅冯玉杰曹新文赵李靖祝建波闫洁
- 关键词：橡胶草TAIL-PCR启动子
