丁虎生
- 作品数:5 被引量:37H指数:3
- 供职机构:江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金:教育部“新世纪优秀人才支持计划”浙江省科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域:生物学轻工技术与工程更多>>
- 抗黄曲霉毒素B1单链抗体在大肠杆菌中的表达及优化被引量:4
- 2009年
- 【目的】继杂交瘤技术后,重组抗体技术是新一代的抗体制备技术。然而如何用原核系统中较多地表达具有生物活性的单链抗体,避免包涵体形成仍是一个需要探讨的问题。【方法】将目的基因scFv-H4克隆到载体pET22b上,分别转入大肠杆菌BL21(DE3)和Origami(DE3)中,通过改变诱导温度和IPTG浓度,比较具有生物活性的蛋白量以及包涵体的量。【结果】在BL21(DE3)中,pET22b能产生大量表达scFv-H4,而BL21(DE3)的含有trxA和gor双突变的衍生菌Origami(DE3)表达的scFv-H4的总量较少,但是具有生物活性的蛋白量较多(35 mg/L培养物),具有生物活性的蛋白比例也较BL21(DE3)高。另外IPTG的浓度对scFv-H4表达没有显著影响,而较高的诱导温度会促使表达的蛋白形成包涵体。【结论】在较低的温度下,pET22b能在Origami(DE3)能较好地表达具有生物活性的scFv-H4,减少包涵体的比例,为后续的抗体性质研究和改造奠定了基础。
- 杨炼张艳红丁虎生王丽云陈卫张灏
- 关键词:黄曲霉毒素单链抗体
- 幽门螺旋杆菌单链抗体的筛选及鉴定被引量:1
- 2008年
- 为了获得幽门螺旋杆菌特异性单链抗体scFv,通过噬菌体展示技术,首次直接用幽门螺旋杆菌细胞Hp对噬菌体单链抗体文库Tomlinson进行单链抗体的筛选,经5轮筛选后,通过ELISA方法检测,从随机挑选的96个克隆中获得了8株阳性克隆。再分别将阳性克隆与10种常见菌进行ELISA的交叉反应,最终得到1株特异性表达抗Hp的scFv的噬菌体JH1。随后又进一步对JH1所表达的scFv基因进行PCR扩增,分别得到scFv的VH片段、VL片段,全长基因分别为527 bp、368 bp和935 bp,这些包含着部分载体序列的DNA片段与理论值相符。通过对scFv全长基因进行测序,在NCBI中进行基因序列比对,与已报道的一种植物RNA病毒的复制酶单链抗体基因序列有96%同源性。
- 纪卿丁虎生杨炼王铁斌张灏陈卫
- 关键词:幽门螺旋杆菌噬菌体展示SCFV细胞筛选ELISA
- 产胞外多糖的乳酸菌的简便筛选与鉴定被引量:25
- 2008年
- 乳酸菌胞外多糖具有优良的功能性质。根据产胞外多糖乳酸菌的性质,开发了菌落拉丝法作为产胞外多糖乳酸菌的简便初筛方法。以分离菌落在MRS筛选培养基上的拉丝长度为初筛指标,以胞外多糖产量(硫酸-苯酚法)为复筛指标,从自然发酵酸乳和自然发酵蔬菜中分离得到了3株胞外多糖产量较高的乳酸菌,经API细菌鉴定系统鉴定,分别被鉴定为短乳杆菌BT0898、植物乳杆菌NYC30和鼠李糖乳杆菌YHOC137。
- 田丰伟丁虎生丁纳赵建新张灏陈卫
- 关键词:乳酸菌胞外多糖
- 抗黄曲霉毒素B1单链抗体的筛选和鉴定被引量:4
- 2009年
- 【目的】从Tomlinson(I)噬菌体抗体库中筛选人源化抗黄曲霉毒素B1单链抗体蛋白(scFv)并进行鉴定。【方法】分别采用甘氨酸洗脱、胰蛋白酶洗脱、游离AFB1竞争洗脱和AFB1竞争洗脱加胰蛋白酶处理4种方法对噬菌体抗体进行特异性洗脱。将筛选到的噬菌体阳性克隆转化到大肠杆菌(Escherichia coli.)HB2151,IPTG诱导表达scFv。ELISA检测和基因序列测定。【结果】比较4种洗脱方法,发现用AFB1竞争加胰蛋白酶洗脱筛选到阳性克隆的的概率最高,把此方法得到的阳性噬菌体克隆转化大肠杆菌HB2151表达,竞争性ELISA检测得到2个能特异性结合游离的AFB1阳性克隆。间接性ELISA测定相对亲和力分别为0.4μg/mL和0.7μg/mL。测序证实scFv属于人类免疫球蛋白可变区。【结论】利用噬菌体展示技术获得高特异性抗黄曲霉毒素B1的人源化单链抗体,本实验方法可以为其它抗半抗原重组抗体的筛选提供一定的借鉴意义。
- 王铁斌丁虎生杨炼纪卿陈卫张灏
- 关键词:黄曲霉毒素B1
- 食品科学专业本科生微生物学的教学方法被引量:3
- 2007年
- 微生物学是一门不断发展的学科。微生物学课程理论和应用性强,与食品生产、销售和食用等环节有着密切联系。结合我校食品专业的传统优势,对微生物学教学方法进行了总结和探讨。有效的多媒体教学和引导式教学在微生物学的课堂教学以及对实验内容的精心选择和实验方式的创新,有利于加强学生对理论知识的理解和科学思维能力的培养。
- 丁虎生戴小军陈海琴陈卫张灏
- 关键词:食品专业微生物学教育方法