目的探究NBR1对过量氟致成釉细胞氧化应激损伤的影响。方法取LS8细胞进行培养,待密度达70%~80%时,分别加入含Na F 0、1、2、4、8 m M的培养基培养24 h,另外,将加有2.0 m M Na F培养基的细胞分别培养至0、6、12、24、48 h,q RT-PCR和Western blot分别测NBR1 mRNA和蛋白水平。化学合成NBR1 siRNA,转染LS8细胞后行2 m M Na F刺激,24 h后测Sod、Gpx1 mRNA和cyto c、γ-H2AX蛋白表达。结果不同浓度Na F(0~8 m M)作用LS8细胞24 h后,随着Na F浓度增加,NBR1蛋白表达呈剂量依赖性增加。当作用于LS8细胞的Na F浓度为2 m M时,随着时间增加,NBR1蛋白表达呈时间依赖性增加。q RT-PCR结果显示2 m M Na F处理LS8细胞24 h后,NBR1 mRNA水平显著增加。NBR1 siRNA干扰LS8细胞后,与对照组比较,NBR1 siRNA显著抑制NBR1表达。Na F处理的细胞中Sod、Gpx1 mRNA水平显著下降,cyto c、γ-H2AX蛋白表达显著增加,与Na F+GFP处理组相比,NBR1 siRNA和Na F共同处理细胞后,Sod、Gpx1 mRNA水平明显下降,cyto c、γ-H2AX蛋白水平明显增加。结论NBR1可能抑制过量氟导致的成釉细胞氧化应激损伤。
