桂卉
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：湖北医药学院基础医学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 酵母双杂交技术筛选宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中FAM92A1-289关联蛋白被引量：5
- 2016年
- 目的应用酵母双杂交技术从宫颈癌He La细胞c DNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选He La细胞c DNA文库中与FAM92A1-289相互作用的蛋白质,用营养缺陷型培养基和X-a-Gal双重筛选实验进行筛选,对筛选结果进行生物信息学分析,对克隆重复率较高的蛋白进行回转验证,将β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆进行测序并分析。结果成功构建酵母双杂交p GBKT7-FAM92A1-289诱饵载体,可在酵母细胞中正常表达FAM92A1-289,且对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象。筛选出在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基及含X-a-Gal的SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基上均能生长且β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆9个。经生物信息学分析发现4种蛋白重复率较高,即增殖细胞核抗原(PCNA)、半乳糖凝集素1(Galectin-1)、内质网高尔基体中间室标记物53(ERGIC-53)、重组人BCL2相关永生基因1(BAG1),并均与FAM92A1-289存在相互作用。结论利用酵母双杂交技术在Hela细胞c DNA文库中成功筛选出与FAM92A1-289相互作用的蛋白,为进一步研究FAM92A1-289的功能提供了新线索。
- 沈君豪方娟郭兴荣桂卉涂汉军阮绪芝
- 关键词：酵母双杂交技术GALECTIN-1
- FAM92A1-289表达的宫颈癌HeLa细胞稳转株的构建及其对细胞增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的构建FAM92A1-289表达的宫颈癌He La细胞稳转株,并观察其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法构建重组载体CMV-SP6-TALEN-GFP-289,并转染至宫颈癌He La细胞。通过嘌呤霉素筛选得到稳定表达FAM92A1-289的细胞株He La/289,分别用细胞划痕实验、肿瘤球实验、MTT法检测细胞迁移能力、肿瘤生长速度、细胞存活情况。结果成功构建了超表达FAM92A1-289的宫颈癌He La细胞稳定表达株;经检测,其迁移能力更强、生长速度更快、存活率更高。结论成功构建稳定表达FAM92A1-289的细胞株He La/289;FAM92A1-289基因具有促进宫颈癌He La细胞增殖的作用,可作为细胞增殖调节相关基因。
- 桂卉郭兴荣方娟丁妍沈君豪阮绪芝
- 关键词：宫颈肿瘤细胞增殖
