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李羚
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1
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常州市第一人民医院
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
冯锦
常州市第一人民医院
吴雨岗
常州市第一人民医院
谢海彬
常州市第一人民医院
尹勇
常州市第一人民医院
李忠
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作者
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2016
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NEDD9基因miRNA干扰质粒的构建及鉴定
2016年
目的构建神经元表达发育下调基因9(NEDD9)特异性微小核糖核酸(miRNA)干扰质粒,检测其在胃癌SGC-7901细胞中的干扰效果。方法根据GenBank中提供的NEDD9基因序列,设计4种NEDD9靶向干扰序列(MR0112-1、MR0112-2、MR0112-3和MR0112-4)及1种阴性对照干扰序列(MR0112-N),连接到pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建重组质粒。重组质粒转染人胃癌细胞株SGC-7901;采用FQ-PCR和Western blot法检测转染前后SGC-7901细胞中NEDD9mRNA及蛋白的表达。结果测序表明,4种干扰质粒的干扰序列及读框完全正确。FQ-PCR和Western blot结果显示,转染MR0112-1、MR0112-2、MR0112-3和MR0112-4质粒后其NEDD9表达较未处理组分别下降88.01%、96.70%、78.55%和81.34%(P<0.05),以MR0112-2干扰效果最为明显。阴性质粒组NEDD9mRNA表达与未处理组比较无明显变化(P>0.05)。结论成功构建了NEDD9干扰质粒,为进一步研究NEDD9基因表达在胃癌增殖、迁移、侵袭过程中的作用提供实验基础。
李羚
赵金朋
冯锦
谢海彬
尹勇
吴雨岗
李忠
关键词:
胃癌
微小核糖核酸
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