李伟伟
- 作品数：17 被引量：39H指数：3
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- 肌肽对ECV304细胞缺氧损伤的保护作用被引量：4
- 2009年
- 目的研究肌肽对缺氧所致人体内皮细胞系ECV304细胞损伤的影响。方法建立缺氧条件下ECV304细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对缺氧损伤的ECV304细胞活性的影响,测定细胞培养基中乳酸脱氨酶(LDH)活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观测其细胞结构。结果浓度为10～20 mmol/L肌肽孵育ECV304细胞6 h后,可以抑制缺氧12 h和24 h引起的ECV304细胞活性下降,同时减少LDH的释放,保持细胞骨架完整。结论肌肽对缺氧所致的ECV304细胞伤具有保护作用。
- 白剑张俊迟戈刘丽娜樊淼刘海东李伟伟杨菁
- 关键词：肌肽细胞骨架ECV304细胞缺氧
- 人骨髓间充质干细胞诱导向多巴胺能神经元的分化被引量：1
- 2010年
- 背景:体内外研究发现人骨髓间充质干细胞分化为神经元的比率都明显低于胶质细胞,并且这为数不多的神经元会逐渐死亡,而最终存活的细胞中神经元的数量更少。目的:观察人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为多巴胺能神经元的潜能。方法:分离纯化和扩增人骨髓间充质干细胞,在体外先用碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子进行预诱导后,以胶质细胞源性神经营养因子和血管紧张素Ⅱ联合诱导人骨髓间充质干细胞向神经元和多巴胺能神经元分化。观察分化过程中细胞的形态变化,利用免疫组织化学检测神经元和多巴胺能神经元特异性标志物的表达情况。结果与结论:人骨髓间充质干细胞经诱导后的细胞呈现双极、多极和锥形的典型神经元细胞的形态,明显表达抗人神经巢蛋白[(55.7±4.3)%]和神经元特异性烯醇化酶[(78.2±6.7)%],而且大部分人骨髓间充质干细胞表达酪氨酸羟化酶[(48.5±5.6)%],不表达神经胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白。提示在适宜的条件下,人骨髓间充质干细胞可分化成神经元和多巴胺能神经元样细胞。
- 金辉张蕾李伟伟
- 关键词：神经元样细胞人骨髓间充质干细胞诱导分化
- 人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为多巴胺能神经元被引量：1
- 2012年
- 目的:联合应用不同生长因子与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)体外诱导人骨髓间充质干细胞(hBMSCs),探讨体外hBMSCs向神经元和多巴胺能神经元分化的潜能。方法:获得正常人BMSCs并纯化,先用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮细胞生长因子(EGF)进行预诱导,再用胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合诱导第3代生长良好的BMSCs向神经元分化。利用倒置显微镜观察BMSCs分化过程中细胞形态的变化;通过RT-PCR方法检测诱导前后神经元特异性烯醇化酶(NSE)、多巴胺能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果:不同浓度的AngⅡ诱导2周后,应用倒置显微镜观察到各组BMSCs具有典型神经元样的细胞形态,大多呈双极、多极和锥形;RT-PCR方法检测显示NSE、TH的基因表达量在诱导组较其对照组有显著性增加(P<0.05)。结论:多种生长因子联合AngⅡ可以在体外诱导人BMSCs分化为多巴胺能神经元样细胞。
- 张蕾金辉李伟伟田力李鹏飞
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- L6细胞胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型被引量：11
- 2009年
- 背景:在胰岛素抵抗的细胞模型中,以游离脂肪酸诱导3T3-L1脂肪细胞和高胰岛素诱导的HepG2肝癌细胞最为常见,对分布最为广泛靶组织骨骼肌的胰岛素抵抗模型报道较少。目的:拟使用L6细胞株建立胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-05在辽宁医学院生物化学与分子生物学教研室完成。材料:L6细胞株由中国协和医科大学细胞中心提供。α-MEM培养基为美国Gibco公司产品。方法:复苏后的L6细胞置于α-MEM培养基中诱导培养14d,以考马斯亮蓝染色观察肌管出现来确定L6成肌细胞株分化完成。将分化后的细胞建立胰岛素抵抗模型,按1×106/孔接种于24孔板内,用含体积分数为0.02胎牛血清的α-MEM培养,以L6细胞贴满24孔板的板底为宜。换液后,向各孔内分别加入含体积分数为0.02牛血清白蛋白的α-MEM无血清培养基饥饿培养5h。设立2组,实验组的板孔内加入含1×10-7mol/L胰岛素的HEPES缓冲液(136mmol/LNaCl,4.7mmol/LKCl,1.25mmol/LMgSO4,1.2mmol/LCaCl2,0.2%牛血清白蛋白,20mmol/LHEPES,pH7.4)孵育1h;对照组的板孔内加入不含胰岛素的HEPES缓冲液孵育1h。弃上清后用HBS缓冲液冲洗,每孔内分别加入含0.1mol/L葡萄糖的HBS缓冲液100μL,孵育10min后取出置于冰板上快速回收上清。主要观察指标:考马斯亮蓝染色观察L6细胞出现肌管结构情况,葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖浓度。结果:诱导前L6细胞未见肌性结构出现,诱导分化后L6细胞内出现肌管结构。使用α-MEM无血清培养基饥饿培养1,3h,两组上清中葡萄糖浓度基本相似(P>0.05);使用α-MEM无血清培养基饥饿培养5h后,实验组上清中葡萄糖浓度明显高于对照组(P<0.05)。结论:诱导分化成肌后的L6骨骼肌细胞经α-MEM无血清培养基饥饿培养5h,在胰岛素浓度为1×10-7mol/L的刺激下可形成胰岛素抵抗的骨骼肌细胞模型。
- 杨亮迟戈张俊王良君刘丽娜樊淼刘海东李伟伟张健飞杨菁隋鸿锦
- 关键词：胰岛素抵抗
- 卵泡抑素、激活素A与BMP-4在缺血缺氧性脑损伤大鼠脑组织中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的探讨卵泡抑素、激活素A与骨形成蛋白-4(BMP-4)在正常大鼠和缺血缺氧性脑损伤大鼠脑组织中的表达规律及意义。方法将同期受孕60只SD大鼠分为正常组和模型组各30只,每组按照胎鼠发育时间分为胚胎期8.5d、13d、18d,出生后3d、7d、30d6个亚组,每个亚组取5只胎鼠或幼鼠。模型组建立脑缺血缺氧模型,应用SABC免疫组化及RT-PCR方法,检测不同生长时期大鼠脑缺血缺氧后卵泡抑素、激活素A与BMP-4的表达。结果正常组卵泡抑素和激活素A的表达水平很低,免疫组化和RT-PCR法显示随着胎鼠发育的时期表达量逐渐减少,BMP-4在胚胎期几乎不表达,出生后30d略有表达。缺血缺氧后模型组各发育时期卵泡抑素、激活素A与BMP-4的表达量均高于同期正常组(P<0.01),尤其以卵泡抑素和激活素A表达增高明显。结论卵泡抑素、激活素A、BMP-4的表达与发育时间相关,脑缺血缺氧损伤可诱导卵泡抑素、激活素A高表达,但是BMP-4的表达增高不明显,推测在胚胎发育早期卵泡抑素的主要功能是作为激活素A的抑制剂而不是BMP-4的配体来调控神经发育。
- 田安好赵薇张蕾董佳亮李伟伟金辉
- 关键词：缺血缺氧卵泡抑素激活素A骨形成蛋白-4
- 肌肽对低氧所致大鼠血管内皮细胞损伤的保护作用被引量：11
- 2010年
- 目的:研究肌肽对低氧所致大鼠血管内皮细胞损伤的影响。方法:建立低氧条件下大鼠血管内皮细胞损伤模型,用MTT法观察肌肽对低氧损伤的血管内皮细胞活性的影响,测定细胞培养基中LDH活力,并对细胞骨架进行考马斯亮蓝R-250染色观测其细胞结构。结果:浓度为10mmol/L～20mmol/L肌肽孵育血管内皮细胞6h后,可以抑制缺氧12h和24h引起的血管内皮细胞活性下降,同时减少LDH的释放,保持细胞骨架完整。结论:肌肽对低氧所致的血管内皮细胞损伤具有保护作用。
- 白剑迟戈张俊刘丽娜樊淼刘海东李伟伟杨菁
- 关键词：肌肽细胞骨架血管内皮细胞损伤
- 血管紧张素Ⅱ联合生长因子诱导人骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元被引量：1
- 2012年
- 目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)联合应用多种生长因子体外诱导人骨髓间充质干细胞(Human bonemarrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)向神经元和多巴胺神经元分化的潜能。方法:从正常人骨髓中分离单个核细胞并对hBMSCs进行纯化、鉴定;hBMSCs先经用碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子预诱导,再用胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和AngⅡ联合诱导生长良好的hBMSCs向神经元分化。倒置显微镜观察hBMSCs分化过程中细胞形态的变化;RT-PCR方法检测诱导前后hBMSCs神经干细胞的标记物巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)、神经胶质细胞的特异性标记物酸性纤维蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)以及多巴胺能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase,TH)等标志物的表达情况;免疫荧光法检测诱导前后hBMSCs的NSE、TH和GFAP蛋白表达情况。结果:流式分析获得了高纯度的hBMSCs。在不同浓度的AngⅡ诱导2周后,倒置显微镜观察hBMSCs,具有典型神经元细胞形态,大多呈双极、多极和锥形;Nestin、NSE、TH的基因mRNA表达量,诱导组相较于对照组,有显著性差异(P<0.05);免疫荧光细胞化学检测结果表明诱导分化后表达NSE、Nestin、TH蛋白的细胞数明显增加(P<0.05),但诱导前后的细胞都不表达GFAP基因。结论:多种生长因子联合AngⅡ可以在体外诱导hBMSCs分化为多巴胺能神经元样细胞。
- 张蕾金辉李伟伟
- 关键词：人骨髓间充质干细胞多巴胺能神经元
- 冬虫夏草提取液对肝线粒体氧化磷酸化功能的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨冬虫夏草提取液(CSE)对糖尿病(DM)小鼠肝线粒体氧化磷酸化功能的影响。方法用四氧嘧啶(Alloxian)建立DM小鼠模型,将DM模型小鼠随机分为模型组和CSE保护组,另设正常对照组及维生素E保护组。利用极谱法在线粒体水平测定以琥珀酸(S)为底物的呼吸控制:态3呼吸速率(R3)、态4呼吸速率(R4)、呼吸控制比(RCR)和磷/氧比(P/O);采用化学发光法测定O2的生成量;通过荧光素-荧光素酶的方法测定H+-ATP酶合成活力;比色法测定抗氧化酶的活性。结果模型组小鼠线粒体呼吸链RCR、P/O、ATP合酶活性以及抗氧化酶活性与正常对照组比较显著降低(P<0.001),态4、O2与正常对照组比较显著增高(P<0.01);CSE保护组呼吸链RCR、P/O、ATP合酶活性以及抗氧化酶活性显著高于DM组,态4、O2含量显著低于DM组(P<0.01),保护作用优于维生素E组。结论 CSE对DM肝线粒体的氧化应激有保护作用。
- 张蕾李伟伟刘树森
- 关键词：线粒体氧化磷酸化超氧阴离子糖尿病冬虫夏草提取液
- 人端粒酶启动子(hTERTp)真核表达载体的构建
- 2008年
- 目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)的启动子,构建真核表达载体pEGFP-hTERT。方法以人类基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增hTERT上游序列长约1135 bp的启动子片段,克隆入绿色荧光蛋白GFP的基因上游,测序鉴定。结果DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致,片段长度为1135 bp。结论人端粒酶启动子的真核表达载体pEGFP-hTERT构建成功,为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗奠定了基础。
- 田力李伟伟李鹏飞张蕾
- 关键词：荧光蛋白肿瘤
- 人生长激素释放激素变异受体1型基因绿色荧光蛋白真核表达载体1的构建及体外表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建人生长激素释放激素变异受体1型(GHRHR-SVT1)基因绿色荧光蛋白真核表达载体1(pEG-FP-N1)并在鼠成纤维细胞株NIH-3T3细胞中的表达。方法GHRHR-SVT1基因是由人胃癌细胞株AGS中扩增出的DNA片段,克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,用高效转染试剂将pEGFP-N1/GHRHR-SVT1转染NIH-3T3细胞,NIH-3T3细胞分3组:非转染组(对照组),只加转染试剂不加质粒;转染空质粒组(pEGFP-N1组),加转染试剂与空质粒;重组质粒转染组(pEGFP-N1/GHRHR-SVT1组),加转染试剂与重组质粒。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测各组转染后各组NIH-3T3细胞的生长情况。结果(1)pGEFP-N1/GHRHR-SVT1经限制性内切酶XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切产生约1 080 bp和4 700 bp 2条带。(2)构建的GHRHR-SVT1cDNA序列与GHRHR-SVT1原始序列(AF-282259)进行对比,第54位碱基突变(A突变为T),为无义突变。(3)重组质粒转染组NIH-3T3细胞增殖率明显高于对照组(P<0.01)。(4)重组质粒转染组NIH-3T3细胞增殖指数明显高于对照组(P<0.01)。结论在适当浓度GHRH(10μmol/L)的培养基中,GHRHR-SVT1能够促进NIH-3T3细胞增殖,并为肿瘤的治疗提供新的思路。
- 田力张蕾李伟伟李鹏飞
