冯涛
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 血清反应因子参与皮质神经元缺糖缺氧诱导坏死样凋亡的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨血清反应因子(SRF)在皮质神经元中的定位及缺糖缺氧(OGD)再灌注损伤后神经元坏死样凋亡中的作用。方法皮质神经元:①培养第6天,免疫荧光观察4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)核染及β3-tubulin神经元特异性标志物表达,验证培养神经元的纯度;②培养第14天,二氨基联苯胺(DAB)显色法观察SRF定位;③培养第6天,给予慢病毒(HIV病毒载体)干扰SRF表达;④培养第14天,制作OGD模型(OGD 2 h,复灌8 h),预给予广谱抗凋亡抑制剂(zVAD-fmk)20μmol.L-130 min。将细胞分为:正常对照组(对照组);OGD/zVAD-fmk/SRF慢病毒阴性对照组(OZ-组);ODG/zVAD-fmk/SRF慢病毒阳性组(OZ+组)。经比色法、Western blot等方法观察SRF蛋白和乳酸脱氢酶(LDH)水平的变化。结果 SRF在神经元中定位于细胞核;经SRF干扰后OZ+组SRF蛋白水平下调(P<0.05);不同处理组神经元分泌LDH水平与SRF蛋白水平变化一致(P<0.05)。结论 SRF参与皮质神经元缺血/再灌注损伤后神经元坏死样凋亡,定位于胞核。
- 冯涛丁红梅董红艳耿德勤
- 关键词：缺糖缺氧
- 去泛素化酶圆柱瘤蛋白研究进展
- 2013年
- 圆柱瘤基因(CYLD gene)是一种肿瘤抑制基因,其突变或者缺失可导致圆柱瘤、毛发上皮瘤、Brooke-Spiegler综合征等病变。目前其分子结构已经研究清楚,但其编码的去泛素化蛋白酶CYLD蛋白的功能却未完全清楚。CYLD蛋白是一种去泛素化酶。CYLD蛋白的N末端主要功能是参与微管微丝的运动与调节。其C末端主要功能却是通过去泛素化各种蛋白的泛素化链,抑制核因子κB(NF-κB)活化,从而调节细胞的生存与肿瘤的发生。同时发现,CYLD蛋白还参与调节肿瘤坏死因子、缺糖缺氧等诱导的凋亡。因此,概述CYLD蛋白的结构与功能可为脑缺血再灌注损伤提供新的治疗靶点。
- 冯涛耿德勤
- 关键词：凋亡
- 去泛素化酶在皮质神经元缺糖缺氧再灌注损伤后坏死样凋亡中的表达被引量：2
- 2013年
- 目的 探讨去泛素化酶（Cylindromatosis,CYLD）在皮质神经元中的定位及缺糖缺氧再灌注损伤后神经元坏死样凋亡中的表达变化.方法 ①皮质神经元培养6d,免疫荧光观察4,6-联脒-2-苯基吲哚（4＇,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）核染及神经元特异性标志物β3-tubulin表达,验证培养神经元的纯度.②原代皮质神经元细胞培养14 d,通过成熟神经元特异性标志物NeuN鉴定神经元,DAPI染核,同时用免疫荧光共定位观察目的蛋白CYLD在神经元内的定位.③培养14 d的神经元首先被分为正常对照组（Control组）,无糖Earle＇s平衡盐组（EBSS组）,Dmso组缺糖缺氧（OGD）复灌不同时间组（0h、2h、6h、8h、12 h）组.预给予广谱抗凋亡抑制剂（zVAD-fmk,zVAD） 20 μmol/L、30 min,缺糖缺氧2h,复灌不同时间点,通过Western、比色法检测神经元CYLD蛋白水平变化、乳酸脱氢酶（LDH）水平.④随后神经元被分为正常对照、OGD组,给予缺糖缺氧2h,复灌8h,通过Western blot观察细胞浆、核内CYLD蛋白表达变化情况.结果 CYLD在神经元中定位于细胞核、胞浆,胞浆CYLD随着缺糖缺氧后复灌时间的延长,8h到达高峰（P＜0.05）,与LDH[分别为Control组（1.00±0.00）,EBSS组（1.07 ±0.03）,DMSO组（1.09±0.03）,0h组（1.40±0.12）,2h组（1.74±0.08）,6h组（2.25±0.12）,8h组（2.97±0.15）,12 h组（3.01±0.08）]水平变化一致（P＜0.05）,随后降低；细胞核内CYLD蛋白在缺糖缺氧2h,复灌8h后无明显变化（P＞0.05）.结论 去泛素化酶CYLD在胞浆中参与皮质神经元缺糖缺氧再灌注损伤后的坏死样凋亡,下调其表达可能保护脑缺血再灌注损伤.
- 冯涛丁红梅耿德勤
- 关键词：缺糖缺氧
