孙冉冉
- 作品数：9 被引量：28H指数：4
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项河南省医学科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 下调Claspin抑制肝癌增殖的研究被引量：1
- 2018年
- 目的探讨Claspin（CLSPN）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达与患者临床特征的关系，观察其下调后抑制肝癌增殖。方法利用癌症基因组图谱（TCGA）数据库分析Claspin基因在374例肝癌组织和50例癌旁组织中的表达及其与患者生存和临床特征的关系；应用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）法和Westernblot检测Claspin基因在Hep3B细胞株中的表达；应用噻唑蓝（MTT）法和克隆形成实验鉴定Claspin下调后Hep3B细胞的增殖和克隆形成能力。经G418筛选稳定株接种裸鼠皮下成瘤，分3组，每组6只，绘制肿瘤生长曲线及组织学检查。结果TCGA数据库分析可见Claspin基因在肝癌组织（5．643±1．599）中表达明显高于正常肝组织（2．752±1．674）（t=11．941，P=0．000），且在肝癌患者中Claspin基因低表达者总体生存（0S）时间和无疾病进展生存（PFS）时间均明显长于高表达者[（3．659±0．355）年比（2．289±0．357）年，LogRank值=15．993，P=0．000；（6．072±0．426）年比（4．771±0．462）年，LogRank值=11．830，P=0．0011．Claspin基因的表达高低与肝癌的病理TNM分期（r=6．149，P=0．013）、分化程度（疋。=8．563，P=0．003）、甲胎蛋白水平（X^2=11．202，P=0．001）显著相关，COX回归分析可见Claspin基因表达高低是患者生存的独立预测因素（r=0．579，P=0．009）。Claspin表达下调后与空白组比较，Hep3B细胞的增殖能力在72h时明显受抑制，抑制率为[（71．316±2．471）％，t=4．823，P=0．000]，相对克隆形成细胞数明显减少[（28．000±3．152）％，t=39．540，P=0．000]。裸鼠皮下肝癌移植瘤，Claspin下调组瘤体[（144．300±15．340）mm^3]生长速度明显低于空白组[（377．000±20．280）mm^3，t=22．410，P=0．000]或阴性对照（NC）组[（363．300±26．980）mm^3，t=17．280，P=0．000]；下调组Claspin蛋白表达显著低于空白组（t=8．367，P=0．
- 李娟孙冉冉孙继红朱威威宋瑞鹏余祖江
- 关键词：CLASPIN肝细胞肝癌基因表达增殖
- 河南地区180例艾滋病患者抗病毒治疗效果影响因素分析被引量：4
- 2015年
- HAART能有效抑制HIV复制并重建机体免疫功能。免疫学和病毒学指标评价发现，联合使用抗病毒药物可以多位点同时阻断病毒复制，大幅度降低病毒载量，提升CD4＋T淋巴细胞数量，改善症状，延长生存期。
- 谷军生孙冉冉李娟申珅邢霁远余祖江
- 关键词：抗病毒药物艾滋病患者机体免疫功能HIV复制HAART
- 丙酮酸激酶同工酶M2在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响被引量：1
- 2019年
- 目的:探讨丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响。方法:利用免疫组化法检测胆囊癌和癌旁正常组织中PKM2蛋白的表达。采用siRNA转染试剂将PKM2 siRNA和阴性对照SiRNA转染入胆囊癌GBC-SD细胞和NOZ细胞中,使用细胞免疫荧光和Western blot法检测两种胆囊癌细胞中PKM2蛋白的表达,应用MTT和Transwell实验检测细胞增殖、侵袭能力,使用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测细胞糖代谢能力。结果:PKM2蛋白在胆囊癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P <0. 001)。PKM2蛋白主要分布于GBC-SD和NOZ细胞的细胞质区域。转染PKM2 siRNA后,胆囊癌GBC-SD和NOZ细胞中PKM2的表达水平降低,细胞增殖、侵袭能力均降低(P <0. 05),同时葡萄糖消耗量、细胞外乳酸生成量和ATP消耗量均明显减少(P <0. 05)。结论:PKM2在胆囊癌组织和细胞中高表达,其与胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力关系密切,有望成为一个新的治疗胆囊癌的靶点。
- 陈建安陈思玉刘丽文陈晓龙朱威威余炎何玉婷孙冉冉任志刚李娟崔光莹余祖江
- 关键词：糖酵解胆囊癌
- 长链非编码RNA HCG18对肝癌细胞生物学活性的影响被引量：2
- 2019年
- 目的研究长链非编码RNA(lncRNA)人类白细胞抗原复合体(HCG18)在肝癌细胞中的表达及作用。方法选取23对来自郑州大学第一附属医院的肝癌、癌旁组织和购自中国科学院细胞库的人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97H和正常肝细胞LO2作为研究对象。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝癌和癌旁组织及肝癌细胞系和正常肝细胞中HCG18的表达。采用小干扰RNA(siRNA)技术沉默MHCC97H和Hep3B细胞中HCG18的表达,同时分别设置阴性对照组,采用si-NC对其进行转染。采用克隆实验、Transwell体外迁移实验、流式细胞周期和凋亡实验检测细胞增殖能力、侵袭能力、细胞周期和凋亡率。结果肝癌组织中HCG18表达量较癌旁组织高,差异有统计学意义(P<0.001),肝癌细胞系Hep3B、MHCC97H中HCG18表达量均较正常肝细胞LO2高,差异有统计学意义(均P<0.01)。转染HCG18 siRNA后,肝癌细胞MHCC97H和Hep3B的增殖、侵袭能力均低于转染si-NC的阴性对照组。HCG18 siRNA转染的MHCC97H和Hep3B细胞被阻滞在G_0/G_1期,凋亡率高于转染si-NC的阴性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 HCG18在肝癌细胞中高表达,其可促进肝癌细胞的增殖和侵袭,有望成为肝癌治疗的新靶点。
- 陈思玉陈建安刘丽文邢霁远任志刚孙冉冉余祖江
- 关键词：肝细胞癌长链非编码RNA
- 靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建与鉴定被引量：3
- 2016年
- 目的:构建靶向低氧诱导因子(HIF)-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒,并体外鉴定其敲除效果。方法:设计靶向HIF-1α基因的gRNA序列,将其插入到CRISPR/Cas9质粒骨架载体p CAG-T7中,转化后挑取克隆,进行测序验证。将构建好的重组质粒体外转染人肝癌细胞Hep G2和SK-Hep-1,利用嘌呤霉素进行筛选并扩大培养获得HIF-1α基因敲除混合克隆细胞,应用Western blot技术检测未转染细胞和混合克隆细胞中HIF-1α蛋白的表达情况。结果:经测序验证,成功构建了靶向HIF-1α的重组质粒p CAG-T7-HIF-1α-gRNA,经Western blot验证,转染该重组质粒后人肝癌细胞株Hep G2和SK-Hep-1经Co Cl2诱导HIF-1α蛋白表达明显减弱。结论:成功构建了靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒载体。
- 何玉婷李娟孙冉冉陈晓龙申珅阚全程余祖江
- 关键词：HIF-1Α肝细胞癌基因敲除
- 靶向PD-L1基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建被引量：2
- 2016年
- 目的:构建靶向PD-L1基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒。方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计并合成靶向PD-L1基因的5对sgRNA序列。为了进一步降低克隆背景和提高构建阳性率,在受体载体中引入毒性蛋白系统(Ccd)。构建p X459-Ccd B重组载体,将p X459-Ccd B载体进行BbsⅠ酶切,将sgRNA插入到p X459-Ccd B骨架载体中,转化到不含Ccd A基因的宿主菌Stbl3中。酶切不完全引起的背景载体将因毒性蛋白的作用杀死宿主菌。转化后挑取阳性克隆,进行PCR和测序验证。结果与结论:经PCR和测序验证,重组质粒p X459-PD-L1-sgRNA构建成功,为下一步体内外敲除PD-L1基因和深入研究其在肿瘤免疫逃逸中的功能奠定了基础。
- 孙冉冉陈晓龙李娟申申李晶晶阚全程余祖江
- 关键词：PD-L1肿瘤免疫基因敲除
- α-烯醇化酶在肝癌组织中的表达及临床意义被引量：4
- 2018年
- 目的:探究α-烯醇化酶(ENO1)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及临床意义。方法:利用TCGA和GEO公共数据库肝癌表达谱数据,分析HCC组织中ENO1 mRNA的表达;依据ENO1 mRNA的表达水平将TCGA数据库中的肝癌样本分为ENO1 mRNA低表达组和高表达组,然后下载目标分析基因集进行富集分析;K-M法绘制生存曲线,比较两组总体生存期(OS)和无进展生存时间(PFS)。采用免疫组化染色方法检测93例HCC及87例癌旁正常组织中ENO1蛋白的表达;将肝癌样本分为ENO1蛋白低表达组和高表达组,对两组进行生存分析。结果:HCC组织中ENO1 mRNA和蛋白表达水平均高于癌旁正常组织(P<0.05);TNMⅢ、Ⅳ期HCC组织中ENO1 mRNA和蛋白表达水平高于TNMⅠ、Ⅱ期组织(P<0.05),病理分级3、4级的HCC组织中ENO1 mRNA表达水平高于1、2级组织(P<0.05)。ENO1 mRNA低表达组中位OS和PFS均大于高表达组(P<0.05);ENO1蛋白低表达组中位OS大于高表达组(P<0.05)。与HCC预后不良相关的基因富集在ENO1 mRNA高表达组,与预后良好相关的基因富集在ENO1 mRNA低表达组。结论:ENO1与HCC的发生发展有关,有望成为HCC诊断及治疗的新靶点。
- 朱威威陈晓龙陈建安何玉婷余炎胡秋月孙冉冉任志刚李娟崔光莹张敏敏余祖江
- 关键词：肝细胞癌
- 半乳糖凝集素-1在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义被引量：4
- 2018年
- 目的观察半乳糖凝集素-1（GAL-1）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法利用癌症基因组图谱（TCGA）中424例样本和肝癌组织芯片84例样本分别分析GLA-1 mRNA和蛋白在HCC中的表达，及其与HCC患者的临床特征及总体生存率（OS）时间的关系。应用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法和Western blot检测GLA-1在LO2细胞和Huh7细胞系中的表达，应用小干扰RNA（siRNA）下调GLA-1 mRNA后，噻唑蓝（MTT）、Transwell、克隆成形实验分别检测不同分组Huh7细胞系的增殖能力、侵袭能力和克隆成形能力。结果在TCGA数据库中，GLA-1 mRNA在肝癌中的表达水平高于在癌旁中的表达（11.930±0.056比11.600±0.081，t=2.112，P=0.035）；GLA-1 mRNA高表达患者的OS时间低于低表达者[（4.757±0.410）年比（6.207±0.485）年，Log Rank值=8.368，P=0.004]；临床特征分析表明，GLA-1 mRNA与患者的TNM分期呈正相关（χ^2=3.859，P=0.049）；GLA-1 mRNA是预后的独立预测因素（r=1.644，P=0.012）。在84例组织芯片中，存在转移和复发患者的GLA-1蛋白评分高于无转移和复发者（2.391±0.114比0.895±0.155，t=45.260，P=0.000），（2.375±0.128比1.114±0.160，t=39.930，P=0.000），且GLA-1蛋白高表达患者的OS时间显著低于低表达者[（2.801±0.393）年比（3.291±0.479）年，Log Rank值=4.125，P=0.018]，GLA-1蛋白也是预后的独立预测因素（r=1.857，P=0.009）。GLA-1 mRNA和蛋白在Huh7细胞中表达较LO2细胞高4倍，GLA-1下调组增殖在72 h[（69.580±2.341）%，t=12.990，P=0.006]和96 h[（70.390±3.782）%，t=7.830，P=0.016]时较阴性对照组明显抑制，侵袭细胞数（20.670±0.882比47.000±1.155，t=18.120，P=0.000）和克隆成形数（33.330±0.882比73.000±1.155，t=27.300，P=0.000）较阴性对照组明显降低。结论GLA-1 mRNA和蛋白的高表达提示肝癌患者更短的总生存期，有助于监测肝癌发病
- 李娟孙冉冉何玉婷梁红霞郭文治余祖江
- 关键词：肝细胞肝癌基因表达预后
- 高迁移率族蛋白2在肝癌组织中的表达及对肝癌细胞生物学活性的影响被引量：8
- 2019年
- 目的:探究高迁移率族蛋白2(HMGB2)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及对HCC细胞生物学活性的影响。方法:利用TCGA和GEO公共数据库数据,分析HMGB2 mRNA在HCC组织中表达的特点。采用Western blot法检测正常肝细胞LO2和HCC细胞SMMC7721、Hep3B中HMGB2蛋白的表达。分别用HMGB2 siRNA和阴性对照siRNA转染SMMC7721和Hep3B细胞,采用CCK-8检测细胞增殖,Transwell体外迁移实验检测侵袭能力,流式法检测细胞周期和凋亡,以未转染细胞为空白对照。结果:HCC组织中HMGB2 mRNA的表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05),TNM分期晚、分化程度低和甲胎蛋白高表达的HCC组织HMGB2 mRNA表达水平更高(P<0.05);Kaplan-Meier法生存分析结果显示,HMGB2 mRNA高表达者的总体生存期、无进展生存时间小于低表达者(P<0.05)。与空白对照和阴性对照siRNA转染细胞相比,HMGB2 siRNA转染的SMMC7721和Hep3B细胞中HMGB2蛋白表达降低,细胞增殖、侵袭能力降低(P<0.05),细胞被阻滞于G0/G1期(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05)。结论:HMGB2高表达能够促进HCC细胞的增殖、侵袭能力,有望成为HCC诊断及治疗的新靶点。
- 陈建安陈思玉刘丽文朱威威陈晓龙余炎何玉婷孙冉冉任志刚李娟崔光莹余祖江
- 关键词：肝细胞癌
