周李杰
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 供职机构：山东农业大学园艺科学与工程学院作物生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 苹果组蛋白脱乙酰化酶基因HDA19的生物信息学分析与胁迫响应研究被引量：2
- 2016年
- 从‘嘎拉’苹果中克隆了MdHDA19(MDP0000132078)基因。它编码1个脱乙酰化酶,该基因ORF为1494bp,编码497个氨基酸,预测其蛋白质分子量为55.73kD,等电点为4.98。进化树分析表明,HDA19在不同物种间的氨基酸序列保守性较高,其中苹果MdHDA19与可可树TcHDA19亲缘关系最近(87.05%)。MdHDA19表达模式分析显示,其在苹果各个器官中均有表达,尤其在根和花中表达量较高。MdHDA19与苹果中MdSAT18互作,MdHDA19受到盐胁迫诱导,可能参与盐胁迫的调控。MdHDA19表达受低温(4℃)和高温(40℃)诱导,说明MdHDA19可能参与调控苹果对温度胁迫的响应。并用原核诱导的方法在体外表达了MdHDA19蛋白。
- 张蕊芬刘会周李杰郭颖郝玉金由春香
- 关键词：苹果盐胁迫原核表达
- 苹果蛋白磷酸酶基因MdPP2C-Like的克隆及其对ABA的响应分析被引量：6
- 2018年
- 以‘嘎拉’苹果(Malus×domestica Borkh.)为试材,克隆了ABA信号转导过程中的响应基因蛋白磷酸酶基因MdPP2C-Like(基因序列号MDP0000126636)。基因结构分析显示,MdPP2C-Like定位于苹果8号染色体上,含有5个外显子与4个内含子;该基因全长1 035 bp,编码344个氨基酸,预测其蛋白质分子量为37.84 k D,等电点(p I)为5.72。蛋白质结构分析发现,其存在1个蛋白磷酸酶2C(PP2C)保守结构域,并与拟南芥中的A类PP2C保守结构域高度同源。构建的系统进化树表明MdPP2C-Like与At4G32950位于同一进化支,同源性较高。亚细胞定位结果表明,MdPP2C-Like主要定位于细胞核,少数分布在细胞质。定量分析显示,MdPP2C-Like在苹果不同组织中表达量不同,根中表达量较高。对获得的转基因拟南芥株系和苹果愈伤组织进行ABA响应分析,结果表明该基因的过量表达降低了植株和愈伤组织对ABA的敏感性。以上结果表明,克隆得到的MdPP2C-Like在响应ABA信号过程中起着重要作用。
- 张春玲周李杰王桂栾李媛媛王小非郝玉金
- 关键词：苹果
- 苹果MdcyMDH过量表达对光合、激素和生长的影响被引量：6
- 2015年
- 【目的】获得过量表达苹果细胞质苹果酸脱氢酶基因(Mdcy MDH)的苹果植株,评价其过量表达对转基因株系生长的影响,并通过光合特性和和激素水平来探讨其调控生长的机理,为进一步揭示该基因调控生长发育的机制奠定基础。【方法】从苹果叶片中克隆Mdcy MDH编码区,连接植物表达载体p BI121,转化农杆菌LBA4404;利用农杆菌侵染‘嘎啦’苹果叶片,通过叶片再生的方法获得Mdcy MDH过表达的转基因苹果株系。以分化的苹果组培苗叶片为材料,提取基因组DNA,利用来自35S启动子和转化基因序列的引物,通过PCR初步筛选转基因株系;然后,提取初筛的转基因苹果组培苗叶片RNA,分别采用半定量和荧光定量PCR的方法检测Mdcy MDH表达量,来确定Mdcy MDH过表达株系。以继代培养40和60 d的野生型和转基因苹果组培苗为材料,进行生根处理,30 d后测定Mdcy MDH过表达对组培苗表型以及株高、叶片数量、根重等生长参数的影响。以驯化的、在大田生长一年的野生型和转基因苹果苗为材料,测定叶片光合参数和叶绿素含量的变化;以组培苗为材料,利用液质联用仪测定叶片内源激素含量的变化。【结果】以苹果叶片基因组DNA为材料,PCR初步筛选获得了3个转基因株系,即Line2、Line 3和Line 4;半定量和荧光定量PCR检测发现Line 2和Line 4中Mdcy MDH表达量分别比野生型提高了12倍和5倍,因此确定以上两个株系为Mdcy MDH过表达株系。此外,Mdcy MDH过量表达也提高了叶绿体苹果酸脱氢酶基因(Mdch MDH)表达量。组培苗生根培养30 d后,Mdcy MDH过表达对转基因株系的株高、叶数目、茎粗度、地上部重量未造成显著性影响,但小幅提高了转基因株系的株高和地上部总重量;与野生型相比,Mdcy MDH过量表达显著提高了根系的重量和总鲜重。Mdcy MDH过表达显著提高了转基因株系的光合速率,Line 2和4光合速率分别提高了13.2%和15.1%
- 王庆杰金仲鑫周李杰郝玉金姚玉新
- 关键词：苹果MDH转基因生长势光合特性脱落酸
