- 钾-氯协同转运子1新的同分异构体的发现及其转录调控意义被引量：2
- 2005年
- 目的寻找钾-氯协同转运子(KCC)1新的同分异构体及分析其意义。方法抽提正常人肾组织RNA,用已发表KCCl序列设计引物,进行cDNA末端快速放大(RACE)及RT-PCR,以Northern印迹分析证实新的同分异构体的存在,并用生物信息学方法比较新序列。结果RACE和Northern印迹分析结果证实在人肾组织中有3种KCCl的新的同分异构体,与野生型KCCl不同的是,新的KCCl同分异构体2含部分内含子1的序列(外显子1b),作为其外显子1.蛋白翻译起始密码子也位于该外显子中。新的KCCl同分异构体3含外显子1b、外显子2、内含子2及以后与野生型KCCl相同的序列,蛋白翻译起始密码子位于外显子4,导致-长的5'端非翻译区,内含子2靠外显子3的位置有-翻译终止密码子。新的KCCl同分异构体4含部分内含子3作为其5'端非翻译区。结论新的异构体的发现为KCC家族增添了新的成员,并为KCCl这一重要分子的转录和功能调节提供了新的线索,其特异性序列可用于分析它们在人类疾病中的病理意义。由于启动子类型的不同对同分异构体基因转录的选择起主动的调节作用,多个同分异构体及多个启动子的存在对理解KCCl复杂的生理功能、调节过程和致病机制具有重要意义。
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉吴元俊
- 关键词：同分异构体转录基因调节
- 全反式维甲酸对U251细胞系增殖和MAPK信号通路的影响
- 2014年
- 目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对U251细胞系增殖和MAPK信号通路的影响。方法使用不同浓度的ATRA溶液对脑胶质瘤细胞U251进行孵育,检测ATRA对U251细胞增殖的影响,并通过qRT-PCR与Western blot方法检测MKPs与MAPK信号通路中各蛋白的变化。结果与对照组相比,ATRA可以有效的抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖,并且具有浓度依赖性。qRT-PCR结果显示,采用不同浓度ATRA孵育48h后,MKPs mRNA的表达发生改变,但是MKP-5变化情况与下调67LR表达时不同,说明2种方法对MAPK信号通路作用的主要区别是对MKP-5的调控。Western blot实验结果表明,ATRA孵育48h后,MAPK信号通路中各蛋白的磷酸化发生变化,说明ATRA通过控制MAPK信号通路中蛋白的磷酸化程度对U251细胞系进行调控。结论维甲酸通过与不同的维甲酸受体相结合,发挥其生理作用,对脑胶质瘤细胞U251进行调控。ATRA可通过降低磷酸化ERK1/2的表达来抑制肿瘤的增殖,且能调控3种蛋白的磷酸化,说明MAPK信号通路在肿瘤增殖过程中发挥重要作用。
- 师丽娜臧峰周国平
- 关键词：胶质瘤
- 一种新的干扰素调节因子拼接异构体IRF-3b的结构及功能被引量：2
- 2005年
- 目的 干扰素调节因子 (interferonregulatoryfactors ,IRF) 3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子 ,寻找IRF 3新的基因拼接异构体 ,研究其结构及功能。方法 抽提人类细胞RNA ,用IRF 3已发表序列设计引物 ,作cDNA末端快速放大 (RACE)及RT PCR ,生物信息学方法比较新序列 ,亚克隆IRF 3b至 pcDNA3.1 flag ,转染人胚胎肾上皮 2 93细胞 ,用抗flag抗体作Westernblot分析 ,用荧光素酶功能分析的方法观测IRF 3b对病毒诱导的干扰素 β启动子荧光素酶活性的影响。结果 发现了一种新的IRF 3拼接异构体IRF 3b ,IRF 3b用了紧接第七外显子前的 1 6个第六内含子的碱基 ,导致阅读框架移位 ,相应蛋白质的C端第 32 8～ 4 52位为不同于IRF 3的新C末端。Westernblot出现预期的相对分子质量 (Mr)为 57.75× 1 0 3的IRF 3b蛋白强阳性条带。新的外显子序列可在小鼠的表达序列标签 (EST)表达库中找到同源序列 ,提示这种新的异构体在生物演进中有其保守功能 ,IRF 3b荧光素酶功能分析显示 ,该同分异构体能抑制病毒诱导的干扰素 β启动子活性至对照组的 4 0 %～ 50 %。结论 新的异构体的发现为IRF 3这一重要分子的功能调节提供了新的线索 ,它可能是病毒感染通路中干扰素的显性负性抑制剂 ,提示其功能为干扰素产生的?
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉
- 关键词：干扰素调节因子异构体PCDNA3细胞RNA293细胞基因拼接
- 低氧对钾-氯协同转运子1启动子的调控作用被引量：3
- 2005年
- 目的通过观察低氧对钾-氯协同转运子1(KCC1)启动子的作用及对KCC1基因表达的影响,探索低氧诱导因子1α(HIF-1α)结合位点是否为真正的低氧诱导因子结合位点、在低氧环境中该位点的作用以及KCC与低氧间的关系。方法用KCC1野生型启动子和HIF-1α位点变异的KCC1启动子转染人胚胎肾上皮(HEK)293细胞。转染细胞分别在低氧条件下和正常培养条件下培养,用荧光素酶功能分析的方法观测低氧对KCC1启动子荧光素酶活性的影响:用RT-PCR方法比较两种培养条件下KCC1mRNA表达水平的差异。结果低氧条件下野生型KCC1启动子荧光素酶活性为正常培养条件下的KCC1启动子荧光素酶活性的1.8倍,而变异的HIF-1α位点的KCC1启动子荧光素酶活性则在两种条件下差异无统计学意义。低氧条件下HEK293细胞的KCC1mRNA表达水平是正常氧条件下表达量的2.65倍,差异有统计学意义。结论本研究发现了KCC1启动子中有HIF-1α结合位点,低氧可增强KCC1启动子的活性。该位点的变异与否决定了启动子活性是否受低氧的影响。该结果证实了KCC与低氧间的关系,为建立低氧-KCC1-肾小管间质损害之间的链接提供了实验依据。
- 周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉吴元俊
- 关键词：低氧启动子HIF-1Α荧光素酶结合位点
