公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

流感嗜血杆菌D蛋白黏膜免疫保护效果研究被引量：1: 2016年; 目的评估D蛋白(protein D,PD)黏膜免疫对流感嗜血杆菌感染的保护效果,研究其免疫应答机制,为发展新疫苗提供依据。方法运用分子克隆技术构建PD蛋白表达质粒;用含有或无霍乱毒素(cholera toxin,CT)的PD蛋白黏膜免疫C57BL/6小鼠,ELISA方法检测血清Ig G、唾液Ig A及脾细胞的细胞因子分泌水平;建立定植和致死性感染模型,观察细菌清除及小鼠生存情况;以裸鼠和μMT小鼠来研究细胞和体液免疫应答在PD免疫保护效果中的作用。结果单独PD蛋白黏膜免疫野生鼠能诱导高滴度的抗PD Ig G和s Ig A,血清中Ig G1、Ig G2a和Ig G2b亚型水平相当,脾细胞分泌IL-17A增加,小鼠鼻咽部流感嗜血杆菌清除增加,致死性感染生存率为82%;裸鼠和μMT小鼠免疫PD后对流感嗜血杆菌的清除效应和致死性感染保护作用受损,PD抗血清被动免疫μMT小鼠后其抗感染能力恢复;PD+CT组抗体滴度及脾细胞分泌IL-4和IL-17A水平均高于PD组,细菌清除效应与PD组相似,但无致死性感染保护能力。结论无佐剂PD蛋白黏膜免疫能有效诱导黏膜应答,抵抗流感嗜血杆菌的定植与致死性感染,为黏膜疫苗的发展提供了可能的选择。; 邢燕王建敏粟玉凤王虹崔鲂张雪梅孟江萍; 关键词：流感嗜血杆菌黏膜免疫

肺炎链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶GAPDH与热休克蛋白DnaJ的相互作用: 2015年; 目的验证肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)糖酵解关键酶三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和热休克蛋白Dna J的相互作用。方法 PCR扩增S.pn D39 GAPDH蛋白编码基因gap全长,将其克隆至p ET-28a(+),重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导GAPDH-6His的表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE鉴定其纯度。重组GAPDH蛋白经腹部皮下免疫昆明小鼠获得多克隆抗体。Western blot鉴定GAPDH的保守性。采用大肠杆菌双杂交系统、直接结合实验、生物膜层干涉技术(Bio-layer Interferometry,BLI)验证GAPDH和Dna J的相互作用。结果获得了纯度达90%的GAPDH重组蛋白,并获得了效价达107的抗GAPDH多克隆抗体,Western blot检测显示在7株不同血清型S.pn的全菌裂解液和培养上清中均存在和抗GAPDH抗体反应的特异性条带。大肠杆菌双杂交系统显示GAPDH和Dna J共转化菌株能够在3-AT平板及双选择培养平板上生长,提示二者在细菌胞内有相互作用。直接结合实验和BLI显示随着加入GAPDH蛋白浓度的增加,二者的结合量也增加,提示GAPDH和Dna J的结合具有浓度依赖性。BLI实验也显示GAPDH和Dna J的亲和常数为1.12×10-7mol/L。结论糖酵解关键酶GAPDH在肺炎链球菌中保守表达,且为分泌性蛋白;该蛋白和热休克蛋白Dna J在细胞内存在相互作用,且为直接相互作用。; 马峰王建敏王丽滨宋志新徐红梅邢燕粟玉凤张雪梅孟江萍; 关键词：肺炎链球菌蛋白相互作用

肺炎链球菌烯醇化酶与热休克蛋白DnaJ的结合及结合位点鉴定: 2015年; 目的：明确肺炎链球菌糖酵解关键酶烯醇化酶（enolase,Eno）和热休克蛋白DnaJ是否有直接结合及结合位点。方法：原核表达并纯化Eno全长蛋白,鉴定其酶活性,利用重组Eno蛋白皮下免疫昆明小鼠制备特异性抗血清,分析其胞外分泌情况;采用生物膜层干涉（biolayer interferometrvy,BLI）技术和直接结合实验鉴定Eno和DnaJ两者之间是否存在直接相互作用;在前者结果阳性的基础上,截短表达Eno蛋白,通过直接结合实验鉴定Eno蛋白结合DnaJ的位点。结果：成功表达重组Eno蛋白,纯度达90%,该蛋白具有酶活性;重组Eno蛋白皮下免疫昆明小鼠后,获得效价达1∶7.68×106的特异性抗血清;Western blot分析显示,7种不同血清型肺炎链球菌培养上清中均在分子量约47 k D处出现特异性反应带;直接结合试验显示,随着Eno蛋白浓度增加,Eno与DnaJ的结合量也相应增加（r=0.920,P=0.000）,其吸光度值从0.222±0.042（12.5μg/ml）增加到0.569±0.099（200.0μg/ml）;BLI技术测定两者结合的亲和常数为926 nmol/L;截短的Eno（aa1-aa100）与DnaJ的结合量2.25±0.38高于其他截短序列的结合量0.94±0.25、1.08±0.09、0.75±0.12,差异具有统计学意义（P=0.000,P=0.001,P=0.000）。结论：肺炎链球菌Eno蛋白与DnaJ蛋白存在直接结合作用,结合位点主要位于其N端的1～100个氨基酸序列。; 王建敏马峰徐红梅王丽滨邢燕粟玉凤张雪梅王虹; 关键词：肺炎链球菌烯醇化酶 DNAJ 蛋白相互作用

肺炎链球菌cps操纵子的启动子序列点突变可导致细菌荚膜缺失被引量：1: 2015年; 【目的】明确肺炎链球菌荚膜多糖合成操纵子的启动子序列出现的点突变313713 T→C是否可导致细菌荚膜缺失。【方法】Western blot检测肺炎链球菌突变株SPY1(NC_008533.1 313713 T→C)荚膜多糖含量;实时定量荧光PCR分析荚膜多糖合成基因cps2A、cps2B、cps2C以及cps2D的表达量;构建重组质粒pEVP3-cps promoterD39和pEVP3-cps promoterSPY1,分别转化D39和SPY1菌株,通过β-半乳糖苷酶活性检测来验证转入的启动子序列对细菌荚膜合成的影响,并通过电镜观察荚膜结构和荚膜肿胀试验进一步验证。【结果】肺炎链球菌SPY1的荚膜多糖含量较野生型显著下降,其相关基因cps2A、cps2B、cps2C以及cps2D的表达量较野生型D39均显著降低;与D39-pEVP3-cps promoterD39对比,D39-pEVP3-cps promoterSPY1的β-半乳糖苷酶活性下降了76%,与SPY1-pEVP3-cps promoterD39相比,SPY1-pEVP3-cps promoterSPY1的β-半乳糖苷酶活性下降了约79%;电镜结果显示,重组SPY1-pEVP3-cps promoterD39荚膜可恢复至野生型水平,并且重组D39-pEVP3-cps promoterSPY1(NC_008533.1 313713 T→C)荚膜肿胀试验呈阴性。【结论】荚膜多糖合成操纵子的启动子序列点突变313713 T→C可导致荚膜多糖合成基因表达显著下调,从而引起菌株SPY1的荚膜显著减少甚至缺失。; 王建敏徐绣宇马峰徐红梅王丽滨邢燕粟玉凤张雪梅; 关键词：肺炎链球菌荚膜点突变

肺炎链球菌候选蛋白疫苗DnaJ-△A146Ply通过PI3K/Akt和NF-κB信号通路刺激巨噬细胞诱导免疫应答被引量：6: 2016年; 本实验目的是研究肺炎链球菌r Dna J-△A146Ply融合蛋白引起小鼠巨噬细胞的免疫应答机制。原核表达r Dna J-△A146Ply重组蛋白,Ni+柱纯化后去除其内毒素。r Dna J-△A146Ply刺激小鼠来源腹腔巨噬细胞6 h后,提取细胞RNA,RT-PCR检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)m RNA表达水平。24 h后取细胞培养上清,ELISA检测IL-6和TNF-α蛋白表达水平。信号通路抑制剂预处理腹腔巨噬细胞1 h后加蛋白刺激,ELISA检测上清中IL-6、TNF-α蛋白表达水平抑制情况。取不同时间点处理的细胞进行免疫印迹(Western Blot),检测p-Akt和p-NF-κB表达水平。制备获得纯度90%以上、内毒素含量小于0.1 EU/μg的r Dna J-△A146Ply融合蛋白;r Dna J-△A146Ply可刺激腹腔巨噬细胞IL-6、TNF-αm RNA及蛋白水平表达明显上调、增强Akt和NF-κB磷酸化;Akt和NF-κB抑制剂可显著减少IL-6和TNF-α表达。因此,r Dna J-△A146Ply融合蛋白通过Akt和NF-κB信号通路刺激巨噬细胞诱导免疫应答。; 粟玉凤李达根邢燕姚华吴静雯张雪梅; 关键词：巨噬细胞

全选清除导出

共1页<1>

邢燕

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

邢燕

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈