吴勇
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗PD-L1单抗的研制及其对乙型肝炎病毒的抑制效果初步研究被引量：5
- 2016年
- 目的:获得具有阻断PD-1/PD-L1结合活性的Anti-PD-L1单克隆抗体,并在体内和体外模型中初步探索其应用于慢性HBV感染治疗的潜力。方法:利用大肠杆菌原核表达系统和离子交换柱层析纯化手段,表达纯化获得具有体外结合活性的人源和鼠源的PD-1/PD-L1蛋白,采用纯化后的人PD-L1蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗人PD-L1的单克隆抗体杂交瘤细胞株,基于间接化学发光免疫法评估了这些抗体与人源和鼠源重组蛋白的结合活性,并定量评估它们对PD-L1体外相互作用的阻断活性。利用慢乙肝病人PBMC体外刺激方法评估其对T细胞功能的促进作用,在HBV转基因小鼠中评估其抑制HBV的效果。结果:本研究获得了8株稳定分泌Anti-PD-L1的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其中Anti-PD-L1Ab5和Ab6两株单抗与人和小鼠的PD-L1具有较强的交叉反应性,且均可阻断人和小鼠的PD-1/PD-L1结合活性。在慢乙肝病人PBMC刺激培养实验中,Ab5和Ab6可促进γ干扰素水平升高;在HBV转基因小鼠中单剂注射Ab6,48 h后血清HBV DNA水平降低20倍,血清HBs Ag水平降低至基线水平的30%。结论:获得了2株具有阻断人和小鼠PD-1/PD-L1结合活性的单克隆抗体,其在PBMC体外刺激培养系统中可促进慢乙肝病人的T细胞功能,在HBV转基因小鼠中具有显著的抗病毒效果,具备一定的治疗应用潜力。
- 吴勇张天英宋浏伟夏宁邵袁权
- 关键词：治疗性单克隆抗体乙型肝炎病毒免疫治疗
- 利用Gibson Assembly技术构建乙型肝炎病毒1.1倍体复制子被引量：1
- 2015年
- 乙型肝炎病毒(HBV)基因组各开放阅读框高度重叠,因此构建可在体外细胞模型中复制的HBV DNA质粒至少要包含1.1倍以上的HBV基因组.构建HBV1.1倍体复制子的传统克隆方法涉及多步DNA酶切/连接,操作复杂,耗时较长.本研究发展了基于新型克隆技术Gibson Assembly构建HBV1.1倍体复制子质粒的新方法,在获得HBV基因组DNA后仅需1步体外装配即可完成,利用这一方法,本研究成功从4份HBV感染者标本中获得HBV1.1倍体复制子,并通过瞬时转染Huh7细胞,证明其能够支持HBV的体外复制.本研究为从临床标本中快速获得HBV复制子克隆以研究病毒表型功能提供了更为高效的新方法.
- 方琳琳宋浏伟杨林吴勇袁权夏宁邵
- 关键词：乙型肝炎病毒GIBSONASSEMBLY
- 基于Sleeping Beauty转座子系统快速构建不同基因型乙型肝炎病毒稳定整合细胞株方法的研究
- 乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染是全球范围内的重要公共卫生问题。HBV为嗜肝病毒，只能在肝细胞中增殖，目前HBV复制与抑制相关的研究大多采用HBV质粒瞬时转染Huh7或HepG2细胞的方法，...
- 吴勇
- 关键词：乙型肝炎病毒基因转移转座子
