宋凤艳
- 作品数：2 被引量：17H指数：1
- 供职机构：东北林业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金黑龙江省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 地被菊CVB病毒基因的RT-PCR检测被引量：1
- 2016年
- 为建立可靠、灵敏且高效的地被菊中菊花B病毒（Chrysanthemum virus B,CVB）的检测方法,利用特异性CVB基因引物,通过RT-PCR技术进行了特异性、重复性和灵敏度测试,最终利用优化的RT-PCR体系对地被菊植株感染CVB病毒情况进行了检测。结果显示,以染病地被菊植株的总RNA为模板扩增出的特异性片段编码211个氨基酸,与基因数据库中其它来源的CVB基因外壳蛋白同源性为96%~99%,可确定为菊花B病毒外壳蛋白基因;重复性和灵敏度检测中均获得了清晰的目标条带,且1 ng的总RNA即可扩增出特异性片段;对7个地被菊品种共32个植株的检测中,CVB的检出率为56.2%,检测的准确率为68.75%。表明建立的地被菊CVB基因的RT-PCR检测体系可有效用于地被菊植株感染病毒情况的鉴定。
- 田菲王超孙宝泽宋凤艳解莉楠
- 关键词：地被菊RT-PCR
- CRISPR/Cas9系统在植物基因组定点编辑中的研究进展被引量：16
- 2015年
- 当外源DNA通过转基因技术导入植物细胞后,会以同源重组或非同源重组两种不同的方式整合到基因组中,进而获得相应的目标性状。外源DNA与受体细胞序列相同或相近的位点发生重新组合,从而整合到受体细胞的染色体上称之为同源重组;当发生了DNA双链断裂的细胞为了避免DNA或染色体断裂而造成DNA降解或对生命力的影响,而强行将2个DNA断端彼此连接在一起时则为非同源重组。发生非同源重组的细胞其基因组常出现核苷酸片段的插入和/或缺失以及其他突变等多种情况,使得研究者无法得到精确控制的突变结果;而发生同源重组的细胞基因组序列通常不变,通过加入同源重组的供体DNA,可以实现对基因组的精确修饰和改造。由于在植物中产生自发同源重组的概率很低,对植物基因组进行精确修饰和改造非常困难,位点特异性核酸酶的出现和应用,大大提升了同源重组的效率,使基因组编辑变得更加高效和精确,从而使得对包括植物在内的任何物种进行基因组编辑都将成为可能。锌指核酸酶(ZFN)和TALE核酸酶(TALENs)是能够使DNA的靶位点产生DNA双链断裂进而实现基因组定点编辑的常用系统,但在具体应用中发现这两种系统存在着许多缺陷和不足,如脱靶效应、与基因组进行特异结合与染色体位置及邻近序列有关等,另外技术难度大、构建组装时间长也限制了其应用。CRISPR/Cas系统广泛存在于细菌及古生菌中,是机体长期进化形成的RNA指导的降解入侵病毒或噬菌体DNA的适应性免疫系统。Ⅱ型CRISPR/Cas系统经过密码子优化等改造后已成为继锌指核酸酶ZFNs和TALENs后的新型高效定点编辑的新技术,具有突变效率高、制作简单、易操作及成本低的特点。目前,该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确编辑,编辑的类型包括基因的定点插入、小片段的缺�
- 解莉楠宋凤艳张旸
- 关键词：植物基因工程
