严丹
- 作品数：46 被引量：91H指数：6
- 供职机构：云南省第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 过表达GATA-4骨髓间充质干细胞通过外排体修复心肌损伤的机制被引量：2
- 2017年
- 目的:探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外排体(exosome)修复心肌损伤的机制。方法:构建过表达GATA-4的小鼠BMSCs并提取其分泌的exosome。而后将GATA-4-BMSCs-exosome与BMSCs共同培养,空载体-BMSCs-exosome与BMSCs共同培养,BMSCs-exosome与BMSCs共同培养、BMSCs单独培养及小鼠心肌细胞单独培养48h,采用Q-PCR定量检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)、α肌动蛋白(α-actin)、连接蛋白43(connexin 43)、结蛋白(Desmin)心肌特异性抗原表达量。再将过表达GATA-4BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养,空载体-BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养,BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养及心肌细胞单独用于低氧培养无血清培养诱导细胞凋亡作为阳性对照培养48h诱导细胞凋亡。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率。进一步采用TMT标记定量蛋白质组学分析过表达GATA-4小鼠BMSCs分泌exosome内有关细胞分化及抗凋亡的蛋白。结果:Q-PCR显示:过表达GATA-4-BMSCs分泌的exosome可以有效促进BMSCs向心肌细胞转化并具有极强的抗凋亡能力。蛋白质谱提示有8个蛋白有关细胞分化。有6个蛋白有关细胞调亡。其中Slit homolog 2protein及Connective tissue growth factor蛋白既涉及细胞凋亡又涉及细胞分化。结论:过表达GATA-4-BMSCs分泌的exosome可以促进BMSCs向心肌细胞分化并具有抗凋亡能力。Slit homolog 2protein及Connective tissue growth factor蛋白既涉及细胞凋亡又涉及细胞分化。
- 贺继刚韩金秀李贝贝李宏远李洪荣撒亚莲严丹
- 关键词：GATA-4EXOSOME小鼠骨髓间充质干细胞
- 过表达吲哚-2,3双加氧酶慢病毒载体的构建
- 2015年
- 背景:器官移植后的免疫排斥反应或免疫抑制药物严重不良反应使患者得不到有效治疗、治疗效果不佳。基于此背景下,结合最新免疫调节研究结果,试图寻找到一种有效的生物免疫抑制方法。目的:构建过表达吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)慢病毒载体。方法:1将已构建成功的IDO基因插入慢病毒包装质粒GV308中,构建GV308-IDO重组慢病毒包装质粒。2用慢病毒包装辅助元件Psi、c PPT、3FLAG、Tet R、IRES、WRPE、Tet IIP、Ubiquitin Promoter、SV40origin及HIV的基本元件5’LTR和3’LTR,共培养法转染80%融合的293T细胞。结果与结论:Western blot检测经10 g/L琼脂糖凝胶电泳可见在Mr 48 000处有一目的片段,该值与IDO蛋白大小一致。RT-PCR检测可见293T细胞中有IDO基因表达。说明IDO融合基因已经成功重组于慢病毒包装质粒内。
- 贺继刚李洪荣桂龙升李永武严丹
- 关键词：融合基因重组慢病毒IDO
- 孙氏手术改良弓部处理治疗Stanford A型主动脉夹层动脉瘤探讨
- 贺继刚李洪荣桂龙升严丹王平蒋立虹
- 过表达心肌细胞转录因子骨髓间充质干细胞分泌外泌体抗心肌细胞凋亡的分子调控机制被引量：2
- 2019年
- 目的过表达心肌细胞转录因子(GATA-4)的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌的外泌体(BMSC^ATA-4-exosome )可能是修复心肌损伤的关键分子,文章探讨过表达GATA-4小鼠BMSC分泌外泌体(BMSC^ATA-4exosome)抑制心肌细胞凋亡的分子调控网络。方法在过表达GATA-4小鼠BMSC培养体系内加入miR-330-3p模拟剂(miR-330-3p-mimic)提取分泌的exosome与心肌细胞在低氧无血清条件下培养24h作为实验组(过表达miR-330-3p组),将过表达GATA-4组、空载体组、BMSC组作为混杂因素对照,同时将在低氧无血清条件下单独培养24h的心肌细胞及在正常条件下单独培养24h的心肌细胞作为阳性及阴性对照组。采用流式细胞技术检测各组心肌细胞的凋亡率。采用RT-PCR检测各组心肌细胞内miR-330-3p的表达量。并根据microRNA靶基因预测结果采用Western blot检测miR-330-3p对应靶基因Ap2m1及Cnot4转录蛋白表达。结果超过90%小鼠的BMSC表达CD29(表达率为99.71%)、CD44(表达率为97.28%)和SCA-1(表达率为99.4%),仅0.1%的细胞表达CD11b。过表达miR-330-3p组心肌细胞早期凋亡率[(7.90±0.34)%]较阴性对照组[(2.30±0.09)%]高,但较阳性对照组[(51.48±0.40)%]、BMSC组[(18.32±3.03)%]、空载体组[(16.99±2.93)%]、过表达GATA-4组[(10.22±0.35)%]明显降低(P<0.05)。过表达miR-330-3p组心肌细胞内的miR-330-3p的表达[(396.10±1.02)%]较阴性对照组[(1.37±0.33)%]、阳性对照组[(0.26±0.32)%]、BMSC组[(1.40±0.42)%]、空载体组[(1.41±0.27)%]、过表达GATA-4组[(3.80±0.62)%]明显增高(P<0.05)。过表达miR-330-3p组心肌细胞内Ap2m1、 Cont4的表达较阴性对照组、阳性对照组、BMSC组、空载体组、过表达GATA-4组明显下降(P<0.05)。结论过表达GATA-4的BMSCs分泌的外泌体通过miR-330-3p抑制Ap2m1蛋白表达抗心肌细胞凋亡。
- 贺继刚谢巧丽王梓豪严丹李文
- 关键词：外泌体小鼠骨髓间充质干细胞
- 过表达GATA-4骨髓间充质干细胞通过外泌体增强抗凋亡能力探讨
- 通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠骨髓间充质干细胞构建过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞并加入基因开启剂DOX(强力霉素)而后采用SBI公司的ExoQuick-TC提取分泌的exosome.通过电镜及S...
- 贺继刚韩金秀李贝贝李宏远李洪荣撒亚莲严丹
- 关键词：骨髓间充质干细胞心功能
- 小鼠骨髓间充质干细胞亚群向心肌样细胞分化的研究
- 2015年
- 心脏干/祖细胞（CSC/CPCs）在心肌中含量很少,只占1％,有多个亚群,目前报道6个亚群[1],包括侧群（SP）细胞、c-KIT阳性祖细胞、干细胞抗原-1（SCA-1）阳性祖细胞、胰岛素样受体-1（ISL-1）阳性祖细胞、特异表面抗原-1（SSEA-1）阳性祖细胞和心肌球来源祖细胞（CS）.实验通过CSCs 6个亚群抗原标志,对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）进行分选.结果以CD45及CD31为标准可以得到4组BMSC亚群：SCA-1＋/45-/31＋、SCA-1＋/45 ＋/31-、SCA-1＋/45＋/31＋、SCA-1 ＋/45-/31-.各亚群和心肌细胞共培养,其中SCA-1＋/CD45 ＋/CD31＋和心肌细胞共培养后更易表达出心肌细胞标志性分子α-肌动蛋白（α-actin）、连接蛋白43（Cx43）、肌间线蛋白（Desmin）、肌钙蛋白（cTnI）.我们采用芯片技术完成Agilent小鼠全基因4＊44K芯片从分子水平对上述现象进行探讨.
- 贺继刚李洪荣桂龙升李永武严丹王平
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞亚群小鼠Α-肌动蛋白细胞共培养
- 感染性心内膜炎患者手术死亡相关风险因素研究被引量：2
- 2019年
- 目的探讨感染性心内膜炎(infecfine endocarditis,IE)手术死亡风险因素。方法选取2008年1月至2018年1月云南省第一人民医院收治的IE患者80例,根据手术结果分为手术成功组(n=60)和术后死亡组(n=20)o采用回顾性研究方法,收集两组患者的一般资料(包括性别、年龄,有无外周血管疾病,是否吸烟,是否行胸部手术,有无腹痛、胸痛、恶心及低血压)、实验室检查结果及术中停止循环时间。结果最终入选80例IE患者,其中手术成功组60例(75%),术后死亡组20例(25%)。两组年龄[手术成功组(46.2±0.3)岁,术后死亡组(51.3±1.9)岁,P=0.013]、胸痛发生率(手术成功组18.3%,术后死亡组90.0%,P=0.000)、腹痛发生率(手术成功组8.3%,术后死亡组55.0%,P=0.000)、低血压发生率(手术成功组3.3%,术后死亡组75.0%,P=0.000)及血小板计数(PLT)发生率(手术成功组76.7%于60×10^9/L﹤PLT≤150×10^9/L,术后死亡组75.0%于43×10^9/L≤PLT≤59×10^7L,P=0.000)、术中停止循环时间(手术成功组85%60 min矣停止循环时间名120 min,术后死亡组85%120 min<停止循环时间专250 min,P=0.000)比较差异有统计学意义(P<0.05);而性别、吸烟率及外周血管疾病、恶心/呕吐发生率两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。单因素Logistic回归分析结果表明,年龄(B=-0.0441,P=0.0021)、胸痛(B=-0.0321,P=0.0000)、腹痛(B=-0.0125,P=0.0311)、低血压(B=-0.2818,P=0.0312)、PLT(B=-0.1631,P=0.0025)、停止循环时间(B=-0.2513,P=0.0000)与死亡有独立的关联。结论感染性心内膜炎患者的年龄>60岁,术前出现胸痛、腹痛和低血压,术前PLT越低,术中停止循环时间延长,均能增加手术死亡风险。
- 贺继刚李永武桂龙升严丹赵玮
- 关键词：外科手术
- 过表达IDO骨髓间充质干细胞通过外排体促进移植心脏存活的分子机制研究被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外排体促进移植心脏存活的分子基础。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO转染构建过表达IDO大鼠BMSCs,并加入基因开启剂强力霉素(DOX),按照分泌外排体的类型分为3组:过表达IDO-BMSCs-exosome组(过表达IDO组)、空载体-BMSCs-exosome组(空载体组)、BMSCs-exosome组(BMSCs组);然后采用SBI公司的ExoQuick-TC提取3组分泌的外排体,同时建立大鼠腹腔异位移植心脏模型;经尾静脉给予相应细胞分泌的外排体,利用彩色超声心动图检测注射3组外排体后2d移植心脏的心功能变化。另将注射吗替麦考(吗替麦考组)及建模未处理(未处理组)的大鼠作为对照。进而采用小RNA测序技术检测过表达IDO组大鼠BMSCs外排体中与免疫相关的microRAN表达。结果:心脏彩色超声结果显示:过表达IDO-BMSCs分泌的外排体可以有效改善异位移植心脏存活。而根据KEGG分析可见前20位上调microRNA中涉及免疫的有10个,其中miR-540-3p的差异倍数(FC)值上升幅度最大。前20位下调microRNA中涉及免疫的有3个,其中miR-338-5p的FC值下降幅度最大。结论:通过采用小RNA(sRNA)测序技术检测过表达IDO组大鼠BMSC分泌外排体内与免疫相关的microRNA,最终确认上调重点microRNA为miR-540-3p,下调重点microRNA为miR-338-5p。
- 贺继刚韩金秀李贝贝李宏远撒亚莲严丹李洪荣
- 关键词：IDO骨髓间充质干细胞
- 过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞改善异位移植心脏存活被引量：7
- 2017年
- 目的:探讨过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)改善大鼠腹腔异位移植心脏的存活机制。方法:通过慢病毒载体GV308携带IDO基因转染大鼠骨髓间充质干细胞构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞。建立大鼠腹腔异位移植心脏模型,经尾静脉给予相应细胞处理:(1)利用超声心动图检测移植心脏心功能变化。(2)采用小动物活体成像系统评估移植心脏局部荧光强度。(3)再取各组受体大鼠的脾脏,采用流式细胞技术检测CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD274、CD45RA、CD45RA+CD45RB、Treg细胞的表达情况。(4)取各组移植心脏,采用HE染色评估炎性细胞浸润情况。(5)利用液相芯片检测各组血清IL-1ɑ、IL-4、IL-1β、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-18、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3因子的变化情况。结果:(1)给予相应细胞处理,可见过表达IDO-BMSCs处理后2 d移植心脏的EF、FS较其余各组有提高。(2)采用小动物活体评估可见过表达IDO-BMSCs组移植心脏局部荧光强度最强。(3)给予干预措施后2 d可见过表达IDO-BMSCs组脾脏细胞CD40、CD86、CD80、MHCⅡ、CD45RA、CD45RA+CD45RB表达降低,而CD274、Treg细胞的表达增高。(4)采用液相芯片检测各组提取血清可见在2 d时,过表达IDOBMSCs组血清中IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-2、IFN-γ、IL-18是降低的;IL-10、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3表达量是升高的。HE染色证实过表达IDO-BMSCs组炎性细胞浸润少于其他组。结论:过表达IDO的BMSCs可以通过有效调节免疫DC、T细胞及细胞因子,从多个免疫层面改善移植心脏存活。
- 贺继刚李贝贝韩金秀李宏远严丹
- 关键词：IDO大鼠骨髓间充质干细胞免疫抑制
- GATA-4在心肌损伤修复中的作用机制研究进展被引量：4
- 2015年
- GATA-4是调控心脏基因表达的重要转录因子,参与了心脏正常发育、功能基因表达和心肌肥大的病理过程。GATA-4在心脏发育的早期起重要作用,抑制胚胎干细胞中GATA-4的表达可阻断胚胎干细胞向心肌细胞分化,增强GATA-4的表达则增加胚胎干细胞向心肌细胞分化。并且GATA-4还具有抗细胞凋亡的作用,GATA-4在心肌肥大期间成体心肌细胞的凋亡过程中具有重要的作用。通过增加促存活基因的表达,可改善细胞的存活。其在心肌损伤修复、缺血性心脏病治疗等方面成为目前研究的热点。
- 贺继刚严丹王平李洪荣
- 关键词：心肌细胞分化分子机制
