吴江
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 婆罗双树样基因4shRNA干扰载体的构建及其对THP-1细胞的转染
- 2010年
- 目的构建针对婆罗双树样基因4（SALIA）的特异性shRNA干扰载体，并转染THP-1细胞，以期为更深入了解SALIA对白血病的作用，为后续研究提供实验工具。方法设计4条针对不同靶点的SALIA特异性siRNA和-条阴性干扰siRNA，分子克隆方法构建pGPU6／GFP／Neo／SALIA-shRNA干扰载体，转染THP-1细胞，比较未转染细胞、阴性干扰转染细胞和4条SALIAshRNA转染细胞的SALIA表达情况，找出干扰效果最好的SALIAshRNA。结果4种SALIAshRNA均能有效转染THP-1细胞，实时定量PCR（RT—PCR）与Westernblotting结果均显示针对靶点mRNA-1122的pGPU6／GFP／Neo／SALIAshRNA—B干扰效果最佳，SALIA表达减少量最多（P〈O．05）。结论成功构建SALIAsiRNA干扰载体，可选择SALL4shRNA—B载体进-步完成对SALIA基因功能的研究工作。
- 吴江
- 关键词：癌基因SALL4短发夹RNATHP-1细胞小分子干扰
- 携带人Gfi1基因重组慢病毒载体稳定转染32D细胞株的建立被引量：3
- 2009年
- 本研究建立真核细胞表达的Gfi1基因重组慢病毒载体包装系统,并实现Gfi1在32D细胞中长期、稳定的表达,为进一步研究Gfi1基因在恶性血液病中的发生发展建立一个有效的平台。制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(pLOX-Gfi1/pLOX)、包装质粒(pCMVΔR8.2)及包膜蛋白质粒(pMD.G)。用脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T,48小时后收集病毒上清,并转染靶细胞32D;用Western-blot法检测293T及32D细胞中Gfi1的整合及表达。结果表明:慢病毒的3种质粒可以高效转染293T细胞,并成功包装出慢病毒。目的基因Gfi1能被重组慢病毒高效导入靶细胞32D,并稳定表达,在荧光显微镜下可直接观察到GFP。Western-blot能检测到Gfi1蛋白在包装细胞293T及32D细胞中的表达。结论:慢病毒介导的Gfi1基因可以高效稳定转染32D细胞并持续表达,证明本研究建立了一种有效的基因转移系统。
- 黄敏欧东梅吴江赵霞徐金环张晓梅张义成
- 关键词：慢病毒载体
- SALL4 RNA干扰对THP-1白血病细胞生物学行为的影响
- 2010年
- 目的了解婆罗双树样基因4(SALL4)RNA干扰(RNAi)对THP-1白血病细胞生物学行为的影响。方法构建针对SALL4的特异性短发夹RNA(shRNA)干扰载体,并转染THP-1细胞,MTT法检测空白对照细胞,干扰载体转染细胞和阴性载体转染细胞的细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,比较各组细胞的变化与区别。结果SALL shRNA载体转染的THP-1细胞在增殖能力上相对空白对照细胞及阴性对照细胞有明显下降,细胞凋亡率相对对照组细胞有明显上升,有丝分裂M期细胞比例减少。结论SALL4 RNAi后的THP-1细胞肿瘤细胞特征明显被抑制,SALL4对维持THP-1细胞恶性生物学特征有重要作用,SALL4可能是白血病发生发展过程中发挥重要作用的一种癌基因。
- 吴江
- 关键词：THP-1细胞
