蒋凯
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅新苗人才计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫核苷三磷酸水解酶-Ⅱ真核表达质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建弓形虫核苷三磷酸水解酶-Ⅱ(NTPase-Ⅱ)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NTPase-Ⅱ并在COS-7细胞中进行瞬时表达。方法以pBAD-HisB-NTPase-Ⅱ质粒为模板,PCR扩增NTPase-Ⅱ目的基因,将其克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,双酶切及测序鉴定重组质粒。阳离子脂质体法转染COS-7细胞并经SDS-PAGE和Western Blot检测目的蛋白的表达。结果经鉴定,弓形虫pcDNA3.1(+)-NTPase-Ⅱ核酸疫苗质粒构建成功。以脂质体法转染COS-7细胞后,转染细胞可成功地表达弓形虫NTPase-Ⅱ蛋白。结论证实了弓形虫NTPase-Ⅱ蛋白能在真核细胞中表达,为该基因的核酸疫苗研究提供了实验依据。
- 陈镭李成朋陈弟赵徐寒晖蒋凯林佳鑫刘阳阳胡昕谭峰
- 关键词：刚地弓形虫真核表达
- 不同透明贴对无创通气患者鼻梁部压疮形成的影响
- 目的:
针对ICU（包括EICU和RICU）接受无创正压通气(NIPPV)的急性呼吸衰竭患者，无创正压通气不用有创气管插管，而是运用一个通气面罩来替代气管插管或气管切开，通气面罩的使用增加了面部皮损的机会，尤其是鼻...
- 蒋凯
- 关键词：无菌敷料压疮护理
- 文献传递
- 刚地弓形虫自噬相关蛋白3基因的克隆表达与多抗制备被引量：2
- 2014年
- 目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白3(Tg Atg3)基因,并制备能特异性识别该蛋白的多克隆抗体。方法以弓形虫RH株c DNA为模板,构建p ET28a-Tg Atg3重组质粒,转化入大肠埃希菌(E.coli)Rosetta感受态细胞,经自诱导培养基诱导表达,用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,以小鼠抗His标签单克隆抗体作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)进行鉴定。以纯化的Tg Atg3蛋白作为抗原皮下多点注射免疫日本大耳白兔,125μg/(只·次),免疫4次后心脏取血,制备血清,获得特异性抗Tg Atg3多克隆抗体。对制备的多克隆抗体进行Western blotting与间接免疫荧光法(IFA)鉴定。结果双酶切、PCR扩增及测序结果证实目的片段序列正确,原核表达质粒p ET28a-Tg Atg3构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果表明,重组E.coli中可见相对分子质量(Mr)约44 000的可溶性Tg Atg3蛋白的高效表达。抗体检测Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的Tg Atg3蛋白。IFA结果显示,该多克隆抗体可与虫体胞浆内Tg Atg3结合。结论获得重组可溶性Tg Atg3蛋白,制备的多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的天然Atg3蛋白。
- 华倩倩李相志万玉静陈弟赵徐寒晖蒋凯胡昕潘长旺谭峰
- 关键词：刚地弓形虫克隆多克隆抗体
