邓龙飞
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立
- 2017年
- 目的建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物。方法采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用。分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变。结果蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合。在过表达HNF4α的肝癌细胞中,pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P<0.01)。木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响。结论利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具。
- 孙冰洁陈示洁邓龙飞丁晨虹陈斐罗成谢渭芬张新
- 关键词：肝细胞核因子4Α报告基因系统小分子化合物
- 肝细胞核因子1a对HuH7肝癌细胞基因表达谱的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨肝细胞核因子la（HNFla）对肝癌HuH7细胞基因表达谱的影响及其对相关信号通路的调控作用。方法利用慢病毒介导上调或下调HuH7细胞中HNFβ的表达，基因芯片技术检测处理后细胞的表达谱，筛选受HNFla调控的差异基因并利用DAVID软件和相关分析系统进行信号通路归属分析；报告基因实验检测HNFla对TGFβ信号通路的调控作用，同时利用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测HNFla对TGFβ信号通路相关基因的调控作用。结果在HuH7细胞中，携带HNFla基因的慢病毒Lenti—HNFld可显著上调HNFla表达，而含有静默HNFla表达片段的慢病毒Lenti—shHNFld可下调其表达。基因芯片结果显示，受HNFla正向调控差异2倍以上的基因有339个，负向调控差异2倍以上的基因有325个。差异基因信号通路归属分析表明，HNFla能够调控药物代谢、不饱和脂肪酸的合成、糖酵解／糖异生等代谢相关信号通路，同时还参与调控TGFβ、NF—xB、p53等肿瘤相关信号通路。荧光素酶报告基因实验表明，上调HNFβ能够抑制TGFβ信号通路活化；同时实时荧光定量PCR和Western印迹法证实，上调HNFla能够抑制TGFβ信号通路相关基因c—myc和TGFgl基因的表达，从而抑制该信号通路的活化。结论HNFβ对HuH7细胞的基因表达谱和肿瘤发生、发展相关信号通路具有广泛影响，且HNFla能够抑制TGF-β信号通路的活化。
- 丁晨虹邓龙飞王剑谢渭芬张新
- 关键词：基因表达谱
- PEP-1介导的重组肝细胞核因子4α蛋白转导对肝癌细胞的抑制作用被引量：3
- 2015年
- 目的利用细胞穿膜肽PEP-1介导重组肝细胞核因子4α(HNF4α)蛋白进入肝癌细胞,并明确外源融合蛋白PHNF4α对肝癌细胞的作用。方法构建表达质粒pET28a-P-HNF4α,优化原核表达体系的诱导条件,经大量表达、亲和层析纯化及浓缩、透析后获得纯度较高的带有细胞穿膜肽PEP-1的融合蛋白P-HNF4α;P-HNF4α转导人肝癌细胞,蛋白质印迹法检测其穿膜效率,核质分离和细胞免疫荧光检测P-HNF4α的亚细胞定位,Real-time PCR检测肝癌细胞基因表达,CCK-8法检测肝癌细胞增殖,细胞划痕实验及小室侵袭实验检测P-HNF4α对肝癌细胞转移能力的影响。结果细胞穿膜肽PEP-1成功介导融合蛋白P-HNF4α进入Huh7细胞并定位于细胞核;P-HNF4α蛋白可促进Huh7细胞肝功能基因表达,抑制干细胞相关基因表达(P<0.05或0.01),并显著抑制肝癌细胞增殖(P<0.05)、迁移(P<0.001)和侵袭(P<0.05)能力。结论 P-HNF4α可诱导肝癌细胞向成熟肝细胞分化,降低肝癌细胞的恶性程度,是诱导分化治疗肝癌的潜在手段。
- 邓龙飞丁晨虹谢渭芬张新
- 关键词：肝细胞癌肝细胞核因子4ΑPEP-1
