张兴梅 作品数:45 被引量:70 H指数:3 供职机构: 南方医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 南方医科大学南方医院院长基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
针对prominin-1的C-末端肽的适配子筛选和初步鉴定 被引量:1 2013年 目的:采用SELEX技术筛选针对人prominin-1的C-末端18肽(C18)的适配子并进行初步鉴定。方法:采用微孔板法进行SELEX筛选。用合成的KLH-C18作为筛选靶标,进行7轮筛选后进行克隆测序。选取适配子C6进行结合ELISA检测,同时进行与转染prominin-1质粒的U87细胞的免疫组化;利用链亲和素磁珠来进行适配子C6的免疫共沉淀。结果:经过7轮SELEX筛选得到具有特定二级结构的适配子。适配子C6可结合C18肽和表达人prominin-1的U87细胞。Pulldown实验证明了C6可识别天然状态的prominin-1蛋白。结论:利用"靶标切换"的SELEX技术,初步获得能与人prominin-1的C-末端18肽及其天然蛋白结合的适配子,为肿瘤的诊疗奠定实验基础。 张兴梅 石玉生 李晓文 李银 方莹莹关键词:适配子 肿瘤干细胞 核酸适配子及其治疗应用 被引量:3 2006年 核酸适配子(aptamer)是从大容量的组合化学库中筛选出的短的寡核苷酸。与抗体类似,它与靶分子结合具有高特异性和高亲和力。大多数核酸适配子与靶分子结合后对靶分子有抑制作用。适配子可广泛用于抗凝血、抗病毒、抗增殖、抗炎等方面。特异针对人VEGF165的核酸适配子已在美国被批准上市。 张兴梅 石玉生核酸适配子在制备治疗阿尔茨海默氏病药物中的应用 本发明公开了核酸适配子在制备治疗阿尔茨海默氏病药物中的应用。通过SELEX技术筛选出与人AChE结合的适配子Ob2,所述的核酸适配子Ob2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。体外检测Ob2具有抑制AChE活性的作用... 张兴梅 梁志满 石广为 龙利丽 郭婷 罗晓婷文献传递 稳定表达EGFRvIII的U87MG细胞株的建立与鉴定 被引量:2 2010年 目的:构建稳定表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的U87MG细胞株。方法:采用电转染方法将pcD-NA4/TO-EGFRvⅢ质粒导入U87MG细胞,加入zeocin筛选,进一步将细胞有限稀释并克隆化培养以建立稳定的转染细胞株。应用RT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光染色方法鉴定稳定表达EGFRvⅢ基因的细胞株。结果:经RT-PCR鉴定发现V6号和V24号单克隆细胞株EGFRvⅢ基因mRNA水平高表达,进一步Western blot及细胞免疫荧光染色方法鉴定发现V6号细胞株EGFRvⅢ蛋白水平高表达。结论:成功建立了稳定表达EGFRvⅢ的U87MG细胞株,为进一步的抗肿瘤治疗及其机制研究提供基础。 陈明 孙红宇 文荣朝 余政梁 吴巧琪 夏许可 张兴梅 高天明关键词:基因表达 适配子介导的siRNA转运 被引量:2 2012年 小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)因能快速抑制哺乳动物特定基因的表达而用于各种疾病的治疗,然而选择合适的载体将siRNA安全有效地转运进入靶细胞仍是制约siRNA应用于临床治疗的重要因素.越来越多的转运载体被开发出来,其中包括针对细胞表面蛋白的适配子(aptamer).Aptamer是一种能与靶分子高特异性和高亲和结合的寡核苷酸,已经越来越多地用于疾病的诊断和治疗.Aptamer作为载体介导siRNA转运可提高治疗的靶向性并减少副作用,这将为siRNA应用于临床靶向治疗提供一种特异有效的途径.目前,已经发现几种aptamers可以介导siRNA的转运,如anti-PSMA aptamer,anti-HIV gp120 aptamer,anti-CD4 aptamer等.本文将综述aptamer介导siRNA转运的最新研究进展. 谭燕 张兴梅关键词:SELEX 适配子 SIRNA 转运 Cell-SELEX技术在肿瘤研究中的应用 2013年 基于细胞的指数富集配基系统进化(cell-based systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,cell-SELEX)是一项筛选能特异识别靶细胞的适配子的技术。适配子是以高度特异性及亲合力结合靶标的单链RNA或DNA分子,在生命医学的许多领域具有广阔的应用前景。因此有必要综述cell-SELEX技术及其适配子在肿瘤生物标记发现、细胞分子识别、诊断和治疗中的应用。 梁惠玉 高宇博 张兴梅关键词:适配子 肿瘤研究 BNIP3干扰质粒的构建及鉴定 被引量:1 2010年 目的构建大鼠Bcl-2/E1B-19K-interacting protein 3(BNIP3)干扰质粒,研究其对BNIP3蛋白表达水平的影响。方法利用Invitrogen公司在线软件设计大鼠BNIP3(NM_053420)干扰片段,合成互补的单链寡核苷酸,蒋退火后形成的双链克隆入pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR表达载体,连接产物转化感受态细胞,增菌,质粒小量提取并测序。将构建的干扰质粒与大鼠BNIP3表达质粒共转染到HEK293细胞中,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测对目的基因的干扰情况。结果构建的2个干扰质粒经测序证实序列正确,与BNIP3表达质粒共转染后显著抑制外源性BNIP3的mRNA和蛋白表达。结论成功构建了大鼠BNIP3干扰质粒,为进一步研究BNIP3的功能打下了基础。 陈明 张兴梅 李勃兴 孙红宇 李晓文 高天明关键词:BNIP3 RNA干扰 HEK293 生物化学实验教学现状及改革的基本思路 被引量:22 2007年 针对生物化学实验教学中存在的问题,从转变教育观念、改革教学体系、优化实验教学内容、更新实验教学模式及改革管理体制等方面,探讨了生物化学实验教学改革的基本思路。 肖维威 马文丽 张兴梅关键词:生物化学 实验教学 教学改革 白藜芦醇对过表达EGFR的Ⅲ型突变体的胶质瘤细胞的生长抑制作用 被引量:1 2013年 目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对过表达EGFR的Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的U87人脑胶质瘤细胞(U87-EGFRvⅢ)的生长抑制作用。方法:将不同浓度的Res作用于U87-EGFRvⅢ或U87细胞,用MTT法检测Res对细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡作用,免疫印迹法检测Res作用后细胞内EGFRvⅢ的表达情况。结果:经不同浓度Res处理后的U87-EGFRvⅢ细胞和U87细胞均显示抑制细胞生长的作用(P<0.05);流式细胞仪显示不同浓度Res对U87-EGFRvⅢ有促凋亡作用,显著高于对照组(P<0.05),100μmol/L和200μmol/L Res的48 h的细胞凋亡率分别为20.1%±0.8%、46.9%±1.2%;免疫印迹法显示Res作用后U87-EGFRvⅢ细胞内的EGFRvⅢ的表达量显著下降。结论:Res可诱导U87-EGFRvⅢ细胞凋亡、抑制其细胞增殖,并可使细胞内的EGFRvⅢ表达下降。 石玉生 林水苗 邓晓刚 陈龙华 张兴梅关键词:白藜芦醇 胶质瘤 核酸适配子在制备治疗阿尔茨海默氏病药物中的应用 本发明公开了核酸适配子在制备治疗阿尔茨海默氏病药物中的应用。通过SELEX技术筛选出与人AChE结合的适配子Ob2,所述的核酸适配子Ob2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。体外检测Ob2具有抑制AChE活性的作用... 张兴梅 梁志满 石广为 龙利丽 郭婷 罗晓婷文献传递