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环介导等温扩增技术的研究进展被引量：2: 2015年; 环介导等温扩增(LAMP)技术是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有高特异性、高灵敏度、简便快捷、成本低等特点,受到越来越多兽医工作者的关注。目前,该方法已被广泛应用于各种病原微生物的检测。文章对LAMP技术的原理、方法、应用等方面进行了简单论述,最后指出LAMP技术目前还存在一些不足,并对其发展前景进行了展望。; 胡成成大荣赵方余树培蔡树东顾玲玲朱善元; 关键词：分子生物学动物疫病病原微生物

抗Ⅰ型鸭肝炎病毒RdRp蛋白单链抗体库构建及单链抗体淘选: 引言目前鸭病毒性肝炎的防治以疫苗免疫为主,但是毒株变异大大降低了免疫效果,开展防治新方法研究迫在眉睫.单链抗体具有易于构建和表达、分子质量小、穿透力强、特异性好、免疫原性低的优点,是目前报道最多的一种基因工程抗体,在抑制...; 王永娟左伟勇胡成朱善元

环介导等温扩增技术及其在动物疫病检测中的应用被引量：2: 2015年; 环介导等温扩增(LAMP)是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有高特异性、高灵敏度、简便快捷、成本低廉等特点,受到越来越多兽医工作者的关注。目前,该方法已经广泛应用于各种病原微生物的检测。本文就环介导等温扩增技术的原理、方法、应用等方面进行简述,最后指出LAMP当前存在的一些不足之处,并对其发展前景进行了展望,以期为其临床应用提供理论依据。; 胡成成大荣余树培赵方苏玲玲蔡树东顾玲玲王永娟; 关键词：动物疫病

鸭瘟病毒环介导等温扩增检测方法的建立及应用被引量：5: 2015年; 为建立一种简便、快速、灵敏度高、特异性好的鸭瘟病毒(DPV)检测方法,根据GenBank中公布的DPV UL6基因组序列,设计了3对特异性引物,建立了LAMP快速检测方法。该方法的灵敏度可达0.1fg,对其他鸭常见病原体检测结果均为阴性,扩增反应只需在水浴锅中60min内即可完成,可通过肉眼观察颜色变化直接判定结果。结果表明,所建立的LAMP方法简便快捷,省时省力,是适用于现场和基层实验室快速、准确检测DPV的分子生物学方法。; 马丽丽吴双胡成左伟勇洪伟鸣王永娟贾宁朱善元; 关键词：鸭瘟病毒环介导等温扩增技术

一种番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒: 本发明公开了一种番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒，该试剂盒包括：反应液甲：含有10×等温反应缓存液、dNTPs、硫酸镁、内引物1、内引物2、外引物1、外引物2及甜菜碱；反应液乙：Bst DNA 聚合酶，反应液丙：含双抗的灭...; 王永娟朱善元胡成左伟勇王安平洪伟鸣吴双秦枫; 文献传递

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4增强传染性法氏囊病病毒VP2质粒DNA的免疫效应分析被引量：3: 2015年; 为评价分子佐剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)对IBDV VP2质粒DNA的免疫增强作用,试验采用重组质粒载体表达重组蛋白mLTA-VP2-CTLA-4和mLTA-CTLA-4,家兔毒性试验确定其安全性,后选择10日龄非免疫健康鸡进行随机分组试验,设不同剂量mLTA-CTLA-4加IBD活疫苗免疫组、不同剂量mLTAVP2-CTLA-4免疫组、IBD活疫苗免疫组及空白对照组,免疫后用ELISA法定期检测鸡血清抗体IgG及小肠黏膜抗体IgA效价;鸡在加强免疫后用IBDV野生毒株攻击,连续观察2周并计算保护率。结果显示,mLTA-VP2-CTLA-4免疫组、mLTA-CTLA-4加活疫苗共同免疫组产生的IgG和IgA抗体水平与活疫苗免疫组无明显差别,mLTA-CTLA-4加活疫苗共同免疫组产生的IgG和IgA抗体水平略高于mLTA-VP2-CTLA-4免疫组,疫苗对鸡的保护率为100%。结果表明,构建的IBDV分子佐剂DNA疫苗载体能表达无毒性的重组蛋白质,并能产生很好的免疫保护率,为进一步研究IBD亚单位疫苗奠定基础。; 王永娟朱善元李碧春胡成左伟勇; 关键词：传染性法氏囊病分子佐剂细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 VP2

鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定被引量：1: 2015年; [目的]用大肠杆菌表达出CIAV的衣壳蛋白(VP1)作为免疫抗原,以建立鸡传染性贫血病毒(CIAV)的血清学诊断方法。[方法]根据已发表的CIAV的衣壳蛋白(VP1)序列,结合Protean软件预测出抗原富集区域,设计并合成1对引物,利用PCR扩增该区域基因,将扩增成功的VP1基因片段经T4连接酶连接至PGEX-6P-1表达载体。连接成功的重组质粒转化不同的大肠杆菌表达菌株,通过IPTG诱导进行原核表达,筛选出表达量最高的菌株及最佳诱导时间和IPTG诱导浓度。以感染CIAV的鸡阳性血清为一抗,对重组蛋白GST-VP1进行Western-blot分析。[结果]成功获得了重组质粒PGEX-VP1,诱导表达后经SDS-PAGE和Western-blot分析,分子量约71k D的融合蛋白GST-VP1在大肠杆菌Rosseta中以包涵体形式大量表达,并能与鸡传染性贫血病毒阳性血清发生反应。[结论]该研究可为抗CIAV单克隆抗体的制备及血清学诊断方法的建立等研究奠定基础。; 余树培夏文龙胡成吴海涛吴萌赵方成大荣; 关键词：鸡传染性贫血病毒 VP1蛋白原核表达

鸭Ⅰ型肝炎病毒一步法RT-LAMP可视化快速检测方法的建立被引量：10: 2015年; 本研究根据GenBank中登录的鸭I型肝炎病毒（ DHV I） VP1基因的高度保守序列,设计了特异性的引物,建立了一种灵敏、特异、高效的可视化体外环介导等温扩增方法（ RT-LAMP）。结果表明,该方法的灵敏性可达到10 fg,是常规一步法RT-PCR方法的100倍以上。全部反应可以在1.0～1.5 h内完成,并可以直接通过肉眼观察颜色进行结果判定,该方法对其他鸭常见的病原体检测结果全部为阴性,该方法的建立为下一步研制鸭I型肝炎病毒的RT-LAMP快速检测试剂盒打下基础。; 胡成朱善元左伟勇王安平吴双洪伟鸣成大荣马丽丽王永娟; 关键词：环介导等温扩增

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胡成