何慧
- 作品数：11 被引量：24H指数：2
- 供职机构：浙江中医药大学更多>>
- 发文基金：杭州市卫生科技计划项目浙江省公益性技术应用研究计划项目全国名老中医药专家学术经验继承项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 快速联检四种难培养鉴定细菌的多重定量PCR试剂盒
- 本发明提供一种快速联检四种难培养鉴定细菌的多重定量PCR试剂盒，包括四重PCR反应体系，包含针对引起小儿细菌性肺炎四种临床难培养鉴定病原体：流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌、嗜肺军团菌基因的正、反向引物和AllGlo...
- 余道军陈懿何慧
- 文献传递
- 基于MIQE的多重定量PCR联检社区获得性肺炎病原体
- 余道军童文娟陈懿何慧王利民陈岳明栋学妍张卫英
- 2015年12月22日，杭州市卫计委组织专家对杭州市第一人民医院余道军等承担的杭州市卫生科技计划(重大)项目“基于MIQE的多重定量PCR联检社区获得性肺炎病原体”(项目编号：2012ZD001)进行了验收。项目验收组听...
- 关键词：
- 关键词：肺炎病原体
- 一种共提取DNA/RNA病毒核酸的方法
- 本发明提供一种共提取DNA/RNA病毒核酸的方法，用含RNA助沉剂的异硫氰酸胍裂解液裂解经生理盐水稀释标本，使标本中不同核酸病毒的DNA或RNA释放游离于裂解液中，加入磁珠，形成磁珠‐核酸复合物，洗涤后获得核酸洗脱液。本...
- 余道军何慧陈懿
- 文献传递
- 不同液化处理及核酸共提取方法对痰样本中病毒核酸的提取效果比较被引量：1
- 2016年
- 目的比较不同痰液液化方法及不同核酸提取方法共提取痰液中病毒RNA和DNA的效果，并比较其优劣。方法将痰液样本分为二硫苏糖醇（DTT）、氢氧化钠（NaOH）液化痰液组，以生理盐水为对照，分别使用TIANampVirusDNA／RNAKit（方法1）、KBW酶法（方法2）、KBW通用法（方法3）和单一核酸提取试剂盒（方法4）提取核酸，微量核酸分析仪检测核酸纯度，多重定量PCR方法检测核酸的浓度。结果核酸纯度测定结果：生理盐水组中方法2和方法3，DTT处理组中方法1和方法2，NaOH处理组中方法3所提DNA纯度略大于1．8；各组中采用方法l所提RNA纯度均明显超过2，方法4及NaOH处理组中方法3所提R-A纯度均低于1．8，其余纯度均在正常范围内。PCR浓度测定结果：腺病毒（DNA）Ct值：生理盐水组〈NaOH处理组（q=35．09，P〈0．05），生理盐水组和DTT处理组间差异无统计学意义（q=2．54，P〉0．05）；提取方法1〈方法3（q=12．68，P〈0．05），方法1、方法2与方法4之间差异无统计学意义（q=0．84、1．69、2．53，P〉0．05）；呼吸道合胞病毒（RNA）Ct值：生理盐水组〈DIT组〈NaOH组（F=152．76，P〈0．01）；提取方法l〈方法2〈方法3（q=6．98、3．75，P〈0．05），方法2与方法4之间差异无统计学意义（q=1．28，P〉0．05）。结论痰液液化前处理会影响病毒RNA和DNA的共提取，TIANampVirusDNA／RNAKit和KBW酶法对痰样本中病毒核酸共提取效果较好。
- 何慧陈懿潘平潘富根余道军
- 关键词：腺病毒呼吸道合胞病毒
- 一种联检四种呼吸道病毒的多重逆转录定量PCR试剂盒
- 本发明提供一种联检四种呼吸道病毒的多重逆转录定量PCR试剂盒，由核酸共提取液、四重RT‑qPCR反应液、阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品、五个浓度的阳性定量标准品组成。本发明可简便快速地在一个反应管中同时、平行地检...
- 余道军何慧陈懿
- 文献传递
- 一种联检四种呼吸道病毒的多重逆转录定量PCR试剂盒
- 本发明提供一种联检四种呼吸道病毒的多重逆转录定量PCR试剂盒，由核酸共提取液、四重RT‑qPCR反应液、阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品、五个浓度的阳性定量标准品组成。本发明可简便快速地在一个反应管中同时、平行地检...
- 余道军何慧陈懿
- 快速联检四种难培养鉴定细菌的多重定量PCR试剂盒
- 本发明提供一种快速联检四种难培养鉴定细菌的多重定量PCR试剂盒，包括四重PCR反应体系，包含针对引起小儿细菌性肺炎四种临床难培养鉴定病原体：流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌、嗜肺军团菌基因的正、反向引物和AllGlo...
- 余道军陈懿何慧
- 文献传递
- 六种真菌基因组DNA快速提取方法比较被引量：4
- 2015年
- 目的 比较不同方法提取真菌基因组DNA的优劣,寻找一种用于PCR扩增的快速、高效的真菌DNA提取方法.方法 分别用加热裂解法、微波法、反复冻融法、溶壁酶法、蜗牛酶法和试剂盒法提取浙江中医药大学附属杭州第一医院保存的马尔尼菲青霉、小孢根霉、新型隐球菌和白假丝酵母菌DNA,在凝胶成像系统下观察基因组DNA电泳图.采用超微量核酸蛋白测定仪测定基因组DNA的浓度和纯度,并计算产率;同时对提取的基因组DNA进行PCR扩增并测序.采用方差分析和SNK-q检验比较不同方法所得基因组DNA浓度和产率.结果 6种方法提取马尔尼菲青霉（霉菌相和酵母相）、小孢根霉、新型隐球菌和白假丝酵母菌所得DNA浓度和产率差异均存在统计学意义（F=750.83,220.95,669.35,132.01,510.20和1658.35,287.10,963.64,1147.77,4521.22,P值均＜0.01）,且微波法所得真菌DNA浓度和产率最高,加热裂解法次之,试剂盒法最低.所有方法所得DNA经PCR扩增均出现阳性条带.结论 6种方法均可成功提取真菌基因组DNA,微波法和加热裂解法操作简便,所得真菌基因组DNA模板能够满足临床实验室PCR扩增需求.
- 何慧何松哲陈懿张卫英余道军
- 关键词：马尔尼菲青霉DNA提取
- 儿童呼吸道病毒多重定量PCR联检体系的建立及应用
- 目的 探讨不同液化处理对痰液中病毒核酸共提取的影响并比较不同核酸共提取方法的优劣,建立一种简单实用的呼吸道标本核酸共提取的新方法及一种快速、敏感、特异性高的儿童呼吸道病毒多重 RT-qPCR(Reverse transc...
- 何慧
- 关键词：呼吸道病毒
- 文献传递
- 不同保存和处理方式对全血标本总RNA提取的影响被引量：17
- 2015年
- 目的分析全血标本RNA提取的影响因素,并对全血RNA提取条件进行优化。方法收集100例全血标本,混匀后分为低渗红细胞溶解组(A组,50例)和全血直接提取组(B组,50例),利用Trizol试剂提取放置在不同温度、不同保存时间的全血标本总RNA,并采用Ur-2401紫外分光光度计测定其浓度和纯度;另选60例全血标本作为反复冻融组(C组),取不同次数反复冻融的全血标本利用Trizol法直接提取其RNA。结果 A组和B组新鲜标本中所获取的RNA浓度分别为450.0 ng/μL和458.8 ng/μL,37℃保存7 d标本中的RNA浓度分别为374.8 ng/μL和375.2 ng/μL,不同的保存温度与时间均对总RNA浓度(P=0.003、P=0.002)和纯度(P值均为0.011)的差异均有统计学意义,而相同条件下提取的总RNA浓度和纯度的差异无统计学意义(P=0.984、P=0.311);C组全血标本反复冻融的次数与保存时间对总RNA浓度(P=0.002、P=0.001)、纯度(P值均为0.008)差异均有统计学意义,而保存温度对总RNA浓度和纯度差异无统计学意义(P=0.611、P=0.362)。结论不同条件下全血标本中所获取的总RNA浓度有所差异,但在总RNA纯度和成功率方面,低渗破坏红细胞法优于直接全血提取法,反复冻融影响全血RNA提取效率和得率。
- 何松哲何慧陈懿陈羽余道军
- 关键词：RNA提取
