于浩
- 作品数：28 被引量：101H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
- 发文基金：中国国际公共关系协会项目国家科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用
- 2005年
- [目的](1)建立RT-PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA-PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA-PCR和RNA-PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。[方法]用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT-PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PB-MC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。[结果]DNA-PCR和RNA-PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7天,RNA-PCR结果为7/9阳性,DNA-PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有5/9阳性;此后一直到感染后的42天,RNA-PCR和DNA-PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35天下降到4/9,到42天时下降为零。[结论]PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA-PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期——血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。
- 丛喆涂新明蒋虹魏强佟巍孙敏于浩秦川
- 关键词：巢式PCR病毒分离
- 猴副流感病毒SV5的PCR检测方法建立及初步应用被引量：1
- 2005年
- [目的]建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。[结果]利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccIII限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。[结论]本文首次初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。
- 于浩蒋虹佟巍丛喆孙敏涂新明魏强
- 关键词：聚合酶链反应巢式PCR
- 不同手术方法进行内眦开大的临床体会
- 目的：对于不同分类内眦赘皮及患者要求，应用不同手术方法，以探寻最佳效果。方法：根据患者内眦赘皮不同分类及患者对于平行型或者扇形重睑的不同要求，选择改进Park法，倒Z法及重睑线延长法内眦赘皮开大术。结果：应用三种方法治疗...
- 于浩
- SARS-CoV感染后人ACE2转基因小鼠肺组织一氧化氮合酶的变化
- 2008年
- 目的利用人血管紧张素转换酶2(ACE2)转基因小鼠模型研究一氧化氮(NO)在严重急性呼吸综合症(SARS)发病中的作用。方法用PUMC01株SARS-CoV感染野生型及人ACE2转基因小鼠,免疫印迹、免疫组化及分光光度法观察两组动物在感染后3、7d肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血清NO的变化。结果免疫印迹显示,在接种病毒后3d和7d的转基因小鼠肺组织iNOS蛋白密度明显增高。免疫组化显示,接种病毒后3d和7d转基因小鼠肺组织巨噬细胞增多,iNOS表达呈明显的阳性反应。生化测定血清NO结果显示,接种病毒后3d,与攻毒前及相同时间的野生型小鼠相比,NO水平明显升高。结论NO在SARS发病的病理生理过程中可能发挥重要的作用。
- 杨秀红邓巍鲍琳琳于浩蒋虹佟巍高虹魏强秦川
- 关键词：严重急性呼吸综合征一氧化氮一氧化氮合酶
- 猴D型反转录病毒巢式PCR检测方法的建立被引量：2
- 2006年
- 目的建立SRV-1巢式PCR检测方法并进行初步应用。方法针对SRV-1env基因的保守区序列,设计特异性引物,以感染SRV-1 Raji细胞提取出的含有前病毒DNA的基因组DNA为模板,进行巢式PCR反应。扩增产物测序后与GenBank报道的序列进行同源比对。将DNA样本进行10倍梯度稀释,以检测巢式PCR反应的灵敏度。使用该方法对正常Raji细胞以及感染SIV、STLV的外周血淋巴细胞DNA样本进行扩增,检测该方法的特异性。用建立的巢式PCR方法检测40份储存猴血标本。结果使用巢式PCR扩增出的特异片段经测序分析,结果证实与GenBank报道的序列一致。所建立的巢式PCR检测法检测限度可达1.5×10-3ng/μL,而且方法特异。用此方法检测40份猴血标本,未检测到阳性标本。结论初步建立SRV-1的巢式PCR检测方法,该方法灵敏、特异,为SRV-1的检测提供了一个快速、有效的手段。
- 孙敏涂新明丛喆蒋虹佟巍于浩魏强
- 关键词：聚合酶链反应
- SHIV病毒在猴体内的复制与传代被引量：8
- 2005年
- 目的为建立SHIV艾滋病动物模型提供毒力较强的病毒株,将新合成的SHIV XJ02170病毒适应猴体,并增强其毒力。方法实验前采集猴血清并进行血清学检查和PCR检测。选出13只无SIV,STLV1,SRV D和B病毒感染的猴。第一批实验,将SHIV前病毒DNA质粒经肌肉注射到猴体内,每只500μg;SHIV病毒液,经静脉注射到猴体内,每只2ml。病毒质粒和病毒液各接种2只猴。当第一批猴体检出病毒后,10ml感染猴的全血,抗凝后静脉注射到第二批猴体内,当第二批猴检出病毒后再将10ml感染猴的全血静脉注射到第三批猴体内,连续传代4次。每批实验均定期采集血液标本,分别用肝素和EDTA抗凝,进行病毒分离;病毒基因PCR检测;CD4,CD8测定;病毒抗体检测。结果SHIV XJ02170病毒和SHIV XJ02170前病毒DNA质粒在猴体内的传代中均能分离出病毒;从传代猴的血浆和外周血单核细胞(PBMC)中检出了病毒DNA和RNA基因;CD4,CD8测定结果显示有暂时性倒置现象,后变为正常倒置与正常交替出现;在传代的猴血清中检测出特异性HIV病毒抗体。结论SHIV XJ02170病毒与SHIV XJ02170前病毒DNA质粒,均能在恒河猴体内复制。
- 涂新明丛喆蒋虹佟巍魏强杨贵波孙敏于浩秦川
- 关键词：病毒DNARNA基因连续传代批实验SIVSRV
- PCR技术在猴免疫缺陷病毒(SIV)感染模型中的应用被引量：19
- 2005年
- 目的(1)建立RT PCR方法,定性测定SIV感染猴血浆中病毒RNA,比较其与传统血浆病毒分离方法的敏感性;(2)建立DNA PCR方法,检测SIV感染猴外周血淋巴细胞(PBMCs)中的前病毒DNA。(3)检验DNA PCR和RNA PCR方法在猴SAIDS模型应用中的实用性和可操作性。方法用SIVmac251静脉感染恒河猴,定期采血,从血浆中提取病毒RNA,以RNA为模板通过RT PCR法扩增,凝胶电泳定性;从感染猴PBMC中提取带有整合的SIV前病毒DNA的细胞基因组DNA,巢式PCR扩增,凝胶电泳定性。结果DNA PCR和RNA PCR经两轮扩增后均得到一长度为477bp的特异条带,测序鉴定确为目的片段。9只实验猴感染SIV后7d,RNA PCR结果为79阳性,DNA PCR结果为100%阳性,而血浆病毒分离只有59阳性;此后一直到感染后的42d,RNA PCR和DNA PCR的结果一直为100%阳性,而血浆病毒分离阳性率在感染后35d下降到49,到42d时下降为零。结论PCR方法比病毒分离方法的敏感性高。尤其是DNA PCR,既可检测具有活跃病毒复制的受感染细胞,又可检测那些携带病毒处于转录休眠期的细胞,所以在感染的早期和中后期———血浆病毒水平较低的情况下或病毒处于潜伏感染的阶段,它作为猴艾滋病(SAIDS)模型病毒学指标之一有其必要性和重要性。这个指标的检测方法应该是较血浆病毒RNA检测更为敏感。
- 丛喆涂新明蒋虹魏强佟巍孙敏于浩秦川
- 关键词：猴免疫缺陷病毒PCR技术RT-PCR方法RT-PCR法病毒DNASIV
- 睑部Eisler's囊袋的解剖结构及临床应用
- 2011年
- 目的:研究睑部Eisler's囊袋及其周围组织的解剖结构,为相关下睑部老化的临床治疗提供理论依据。方法:通过对10具(20侧)尸颅的解剖,阐明睑部Eisler's囊袋及其周围组织的解剖结构,结合文献复习,对下睑部眶隔脂肪的疝出及治疗方法提出意见。结果:Eisler's囊袋位于外眦韧带与眶隔之间,是一个重要的腔隙,上睑外侧眶隔脂肪可由该腔隙疝出至下睑。结论:对于眶隔脂肪明显疝出的老年患者,行下睑整复术时,要特别注意Eisler's囊袋的评估和修复,从而取得良好的手术效果。
- 于浩王佳琦郑行跃薛文丽
- 关键词：下睑眶隔脂肪
- 不是所有人都适合开内眼角
- 2019年
- 割双眼皮是爱美人士最常做的美容手术,几乎每一位咨询割双眼皮的求美者都会问:要不要同时开内眼角?其实,不是所有人都适合开内眼角,如果内眼角天生的形态就如同鸟嘴,那么,保留一点点内眦赘皮也许是更好、更自然的选择。
- 于浩
- 关键词：内眼美容手术内眦赘皮双眼皮
- 猴副流感病毒SV5的PCR检测方法建立及初步应用
- [目的]建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以...
- 于浩蒋虹佟巍丛喆孙敏涂新明魏强
- 关键词：聚合酶链反应巢式PCR
- 文献传递
