公共文化服务平台

共 2 条记录，以下是 1-2

全选清除导出

排序方式：

细粒棘球蚴Eg95蛋白减毒沙门氏菌重组株的构建与免疫原性分析被引量：6: 2014年; 目的探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性。方法将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体p YA3341中,构建重组质粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定。将重组质粒先后电转入减毒沙门氏菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg95,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组菌Eg95蛋白的表达情况。将重组菌St-Eg95体外培养传10代,每隔一代提取质粒,利用PCR鉴定重组质粒的稳定性。BALB/c小鼠30只,随机均分为6组,其中4组分别经口灌胃给予St-Eg95 1×109、1×1010、1×1011和1×1012 cfu/ml,100μl/只,余下2组分别经口灌胃给予等体积野生型沙门氏菌1×107 cfu/ml和PBS,常规饲养30 d,观察生存情况。另取15只BALB/c小鼠,均分为3组,分别为St-Eg95免疫组、阴性对照组和空白对照组,St-Eg95组和阴性对照组按5×1010cfu/ml剂量的重组菌和阴性菌分别经口灌胃免疫小鼠,0.5 ml/(只·次),共2次,间隔2周。分别于免疫前和末次免疫后2、4和6周采血,收集血清。用细粒棘球蚴Ig G抗体检测试剂盒(间接ELISA)检测Eg95蛋白的Ig G抗体滴度。于末次免疫后6周处死小鼠,用噻唑蓝(MTT)法检测特异性脾淋巴细胞增殖活性。结果经PCR和酶切鉴定表明,重组质粒p YA3341-Eg95构建成功,在重组菌St-Eg95中有目的蛋白Eg95的表达,相对分子质量(Mr)约为18 000,与预期大小一致。重组菌传10代后,PCR仍可扩增到约486 bp的Eg95基因片段。安全性实验结果显示,灌胃给予重组菌和PBS的小鼠30 d后均存活,活动正常;给予野生型沙门氏菌的小鼠均于4 d后死亡。间接ELISA检测结果显示,末次免疫后2周St-Eg95组小鼠特异性Ig G抗体水平即明显升高,显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);末次免疫后4周抗体水平达到最高值,约1∶1 700。小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示,末次免疫后6周,St-Eg95组小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI值)达到1.94±0; 王志昇吴璟林源李红兵刘强王志辉郎多勇杨文; 关键词：细粒棘球蚴 EG95 减毒沙门氏菌免疫原性

细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达被引量：2: 2015年; 目的利用昆虫细胞/杆状病毒系统表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白,用于开发包虫病新型疫苗以及建立相关血清学诊断方法等研究。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR扩增细粒棘球蚴Eg95和Eg.ferritin基因,采用基因拼接法将Eg95和Eg.ferritin融合,将该融合基因Eg95-Eg.ferritin插入到p Fast Bac DUAL载体中,构建重组转座载体后转化DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染Sf-9昆虫细胞,传毒3代,对表达蛋白进行Western blot鉴定。结果成功克隆了Eg95和Eg.ferritin基因,通过柔性氨基酸linker成功获得了融合基因Eg95-Eg.ferritin,经PCR和酶切鉴定成功构建了重组质粒p Fast Bac DUAL-Eg95-Eg.ferritin,Western blot结果证实表达蛋白能够被包虫病人标准阳性血清识别。结论在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中成功表达了细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白,与包虫病人标准阳性血清具有良好的反应性。; 李红兵杨文陈健茂刘强王志辉张昕吴璟郎多勇王志昇; 关键词：细粒棘球蚴杆状病毒

全选清除导出

共1页<1>

王志辉

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

王志辉

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈