刘亮
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路促进高磷诱导血管平滑肌细胞钙化被引量：2
- 2017年
- 目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclear transcription factorκB,NF-κB)信号通路对高磷诱导小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)成骨样分化以及血管钙化过程的影响。方法体外培养小鼠血管平滑肌细胞系。首先将实验分为正常对照组和高磷组,观察高磷对VSMCs的影响;其次分为正常对照组、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)组(PDTC组)、高磷组和高磷+PDTC组,观察PDTC对高磷诱导的VSMCs成骨样分化及钙化的抑制作用;最后分为正常对照组、正常对照+control siRNA组、正常对照+TLR4 siRNA组、高磷组、高磷+control siRNA组、高磷+TLR siRNA组,观察TLR4基因的小分子干扰RNA(siRNA)对高磷诱导的VSMCs成骨样分化及钙化的抑制作用。采用茜素红S染色观察高磷对细胞钙盐沉积的影响,Western blot检测TLR4、p-NF-κB、SM22α、骨形态发生蛋白2(bone morphogenic protein2,BMP2)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达变化。结果与正常对照组相比,高磷处理后,VSMCs的钙盐沉积明显增多[(0.079±0.011)vs(0.193±0.017),P<0.01],TLR4[(0.228±0.008)vs(0.526±0.017),P<0.01]、p-NF-κB[(0.271±0.003)vs(0.454±0.008),P<0.01]蛋白的表达明显升高,与成骨样分化及钙化相关的BMP2、Runx2蛋白表达亦明显升高,而平滑肌细胞标志物SM22α表达则减少;加入PDTC处理后,高磷状态下的VSMCs的钙盐沉积明显降低[(0.121±0.013)vs(0.217±0.031),P<0.01],p-NF-κB[(0.094±0.006)vs(0.380±0.009),P<0.01]表达明显受抑制,BMP2和RUNX2表达明显下降,而SM22α的表达则明显上调;高磷状态下,应用TLR4 siRNA转染VSMCs后,VSMCs的TLR4[(0.117±0.047)vs(0.377±0.012),P<0.01]表达明显受抑制,同样,p-NF-κB[(0.264±0.013)vs(0.601±0.027),P<0.01]的表达亦明显下降,BMP2和Runx2(P<0.01)蛋白的表达明显受抑,而SM22α[(0.321±0.011)vs(0.194±0.004),P<0.01]的表达则明显上升
- 张道海肖堂利余彦霖刘亮刘永郑昌玲聂凌赵景宏
- 关键词：高磷血症血管钙化
- UCP2在硫酸吲哚酚诱导心肌细胞肥大中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)在硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)诱导心肌细胞肥大中的作用和机制。方法分离培养新生Sprague-Dawley大鼠心肌细胞,0、100、250、500、1 000μmol/L IS孵育心肌细胞1 h或500μmol/L IS孵育心肌细胞0、15、30、45、60 min后,Western blot检测心肌细胞UCP2蛋白表达变化。UCP2慢病毒转染心肌细胞后,通过α-actinin免疫荧光染色观察细胞大小,3H-亮氨酸掺入法评价蛋白合成速率,Real-time PCR检测肥大相关基因ANF、BNP和β-MHC mRNA的表达,同时利用MitosoxTM探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成情况。结果与对照组相比,IS处理组心肌细胞的UCP2蛋白水平明显下降(P<0.05);与IS处理组相比,UCP2过表达可以明显抑制IS诱导的心肌细胞ROS生成、体积增大、3H-亮氨酸摄入增加及肥大相关基因(ANF、BNP和β-MHC mRNA)的表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IS诱导心肌细胞肥大可能与其下调UCP2表达及促进氧化应激有关,而UCP2过表达或许可以通过抑制氧化应激拮抗IS诱导的心肌细胞肥大。
- 徐新丽杨可管旭肖堂利何婷余彦琳刘亮赵景宏
- 关键词：心肌细胞肥大解偶联蛋白2
- 硫酸吲哚酚促进肾纤维化的机制研究被引量：5
- 2016年
- 目的探讨尿毒症毒素硫酸吲哚酚（indoxyl sulfate,IS）诱导肾纤维化的作用及可能机制。方法 24只3周龄健康雄性CD-1小鼠,体质量14-15 g,建立1/2肾切除模型后,采用完全随机分组法将小鼠分为IS处理组（n=12）和对照组（n=12）,分别给予小鼠腹腔注射IS 100 mg/（kg·d）和等体积灭菌磷酸缓冲溶液,IS注射4周后留取肾脏标本,Masson染色观察小鼠肾间质胶原沉积情况,免疫组化染色检测观察小鼠肾脏α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和β-catenin蛋白表达变化,Western blot检测β-catenin蛋白表达变化;用不同浓度的IS（0、2、10、50 mg/L）孵育人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）72 h后,Western blot检测β-catenin表达变化。结果与对照组比较,Masson染色发现腹腔注射IS 4周后,小鼠肾脏胶原沉积明显增加[（2.43±0.51）vs（6.57±0.51）,P〈0.05],IS处理组肾小管上皮细胞β-catenin[（0.87±0.74）vs（10.87±1.21）,P〈0.05]以及α-SMA[（1.30±0.56）vs（13.53±0.50）,P〈0.05]的表达均明显增加;与对照组相比,IS处理组HK-2细胞的β-catenin表达显著增加,且呈剂量依赖效应[（0.71±0.71）vs（0.96±0.70）或（0.71±0.71）vs（1.10±0.95）,P〈0.01]。结论 IS可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥促小鼠肾纤维化的作用。
- 余彦霖肖堂利刘亮何婷徐新丽管旭杨可赵景宏
- 关键词：WNT/Β-CATENIN肾纤维化
- 过氧化物酶体增殖物激活受体γ抑制高磷诱导血管平滑肌细胞钙化被引量：1
- 2016年
- 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptorγ,PPARγ)对高磷诱导的小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的抑制作用。方法体外培养小鼠血管平滑肌细胞,先分正常对照组、高磷组(HP,2.6 mmol/L),观察高磷对VSMCs的影响,再分为正常对照组、高磷组(HP,2.6 mmol/L)、罗格列酮组(RGL,10μmol/L)、高磷(2.6 mmol/L)+罗格列酮(10μmol/L)组(HP+RGL),观察PPARγ激动剂罗格列酮对高磷诱导的VSMCs钙化的抑制作用。茜素红S(alizarin red S)染色观察高磷对细胞钙盐沉积的影响。Western blot检测PPARγ、血管平滑肌22alpha蛋白标志物(SM22α)、骨形成蛋白2(BMP2)和成骨特异性转录因子2(Runx2)的表达变化。结果与正常对照组相比,高磷处理后的VSMCs的钙盐沉积明显升高[(0.08±0.02)vs(0.19±0.03),P<0.01],成骨细胞标志物BMP2[(0.26±0.02)vs(0.74±0.03),P<0.01]及Runx2表达[(0.29±0.03)vs(0.91±0.04),P<0.01)],明显升高。同时PPARγ[(0.93±0.04)vs(0.58±0.02),P<0.05]及平滑肌细胞标志物SM22α表达减少[(1.02±0.09)vs(0.77±0.03),P<0.05],而加入罗格列酮后,高磷状态下VSMCs的钙盐沉积明显降低[(0.19±0.02)vs(0.12±0.03),P<0.05],PPARγ[(0.63±0.04)vs(0.85±0.03),P<0.05]和SM22α[(0.69±0.02)vs(0.99±0.03),P<0.01]表达明显上升,相反,BMP2[(1.02±0.04)vs(0.48±0.05),P<0.01]及Runx2[(1.00±0.06)vs(0.67±0.03),P<0.01]的表达则明显受抑。结论高磷诱导VSMCs向成骨细胞分化和钙化可能与下调PPARγ的表达有关,而罗格列酮可通过激活PPARγ抑制高磷状态下VSMCs钙化的发生。
- 刘亮肖堂利余彦霖何婷徐新丽管旭杨可张道海郑昌玲赵景宏
- 关键词：血管钙化高磷血症
