高品
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：北京农学院植物科学技术学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的原核表达及其活性分析被引量：3
- 2015年
- 乙酰胆碱酯酶(ACh E)在神经信号传导过程中起重要作用,是氨基甲酸酯类和有机磷类农药的主要作用靶标.对朱砂叶螨ACh E进行体外表达和纯化,并分析其活性.将朱砂叶螨ace基因序列插入到原核高效表达载体p ET-30a中,构建表达载体p ET-30a/ace,转入表达菌株Escherichia coli BL21(DE3)中,IPTG诱导高效表达;镍柱纯化目的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定目的蛋白;以纯化的螨ACh E为抗原制备抗螨ACh E特异性抗体;改良的Ellman法测定螨ACh E活性.结果获得了相对分子质量(Mr)约为68×103的较高纯度的螨ACh E蛋白,检测大部分为可溶性表达,酶活检测具有乙酰胆碱酯酶活性,并制备了107效价的抗螨ACh E特异性抗体.采用重组ACh E(IC50=5.4 mmol/L)检测毒扁豆碱抑制活性比螨粗酶液(IC50=58.7 mmol/L)灵敏度提高11倍.本研究构建了螨ACh E体外高效表达载体并获得了具有较好活性的重组螨ACh E,可为抗ACh E杀螨剂的体外高通量筛选和以ACh E为靶标的农药残留检测奠定基础.
- 彭博卜春亚师光禄李金玲冯晓姣韩晶玉高品王有年
- 关键词：朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶原核表达纯化半数抑制浓度
- 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶基因的克隆与特征分析被引量：4
- 2014年
- 乙酰胆碱酯酶(AChE)是有机磷和氨基甲酸酯类杀虫(螨)剂的主要作用靶标,为建立以朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)AChE为靶点的杀螨剂体外筛选体系,本研究拟克隆朱砂叶螨AChE基因,并分析其特征.采用同源基因克隆及RACE技术克隆基因,通过荧光定量PCR分析其表达特征.结果获得朱砂叶螨AChE的cDNA序列长为2 512 bp,其中开放阅读框(ORF)为2 064 bp,编码687个氨基酸,N端有信号肽,剪切位点在甲硫氨酸开始的第74-75个氨基酸残基之间,C端有糖酯锚定结构,GenBank登录号为AGI96546.1.序列分析显示朱砂叶螨与其他蜱螨目的AChE有高度的同源性,特别与同属叶螨属的二斑叶螨(Tetranychus urticae)AChE的同源性最高,但氨基酸序列比较分析显示两者酶的催化特性可能存在区别.朱砂叶螨不同发育期AChE的转录水平比较分析显示幼螨期的表达量最高,且从幼螨期开始表达量逐渐下降,成螨期最低.本研究表明朱砂叶螨与二斑叶螨的ace 1有较高的同源性,但酶特性存在差异,朱砂叶螨不同发育时期ace 1基因表达水平的不同可能与不同发育期螨的习性和代谢特性有关.
- 冯晓姣卜春亚师光禄高品王有年彭博李金玲韩晶玉
- 关键词：朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶基因克隆荧光定量
- 朱砂叶螨烟碱型乙酰胆碱受体α4亚基基因的克隆与序列特征分析
- 2015年
- 烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)是一种对神经递质乙酰胆碱起快速反应的激动剂门控离子通道,也是新烟碱类杀虫剂的作用靶标。此研究利用同源克隆结合RACE技术,从朱砂叶螨敏感品系中克隆了一条nAChR基因,全长为2 023bp,开放阅读框长1 635bp,编码544个氨基酸。预测分子量(Mr)为62.20kDa,等电点(pI)为5.00。根据同源性及系统发育分析,将其命名为Tcα4,提交至NCBI数据库,获得GenBank登陆号为KP694228。Tcα4具有nAChRα亚基典型结构特征:N端胞外结构域和C端跨膜结构域。Tcα4与二斑叶螨nAChRα4亚基基因序列同源性高达98.71%,与二斑叶螨其他nAChR亚基基因同源性仅在20.07%~43.16%之间,与其他昆虫nAChRα4亚基基因同源性在45.96%~56.07%之间。系统发育分析结果表明朱砂叶螨与二斑叶螨和肩突硬蜱nAChRα4亚基基因在同一分支,与其他昆虫nAChRα4亚基基因则较远。朱砂叶螨nAChRα4亚基基因的克隆为朱砂叶螨其他nAChR亚基基因的研究及以nAChR为作用靶标的新型杀螨剂的研究提供了一种新途径,奠定了基础。
- 高品王帅管学琼卜春亚卜春亚
- 关键词：朱砂叶螨烟碱型乙酰胆碱受体基因克隆
