石凌超
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华东师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新型基因工程抗体scFab的构建、表达及活性检测
- 抗体是机体免疫系统针对侵入体内的抗原物质所产生的一种特异性免疫球蛋白,抗体研究的发展经历了多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体三个阶段。基因工程抗体是将抗体基因或基因片段通过基因工程技术进行重组,并在不同表达系统中产生的...
- 石凌超
- 关键词：苏丹红I包涵体酶联免疫吸附测定
- 文献传递
- 抗苏丹红单链Fab抗体的构建、表达及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 从分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株SU211中克隆抗体轻链Lc基因和重链Fd基因,将Lc、Fd基因以及Linker克隆到载体pET24a(+)中,构建scFab表达载体并在E.coli BL21(DE3)获得表达,SDSPAGE和Westernblot分析表明其表达形式为包涵体,相对分子质量约为57 kD,与理论预期值相符。经复性后,ELISA鉴定结果表明复性抗体对苏丹红Ⅰ具有很高的结合特异性。本研究为新型基因工程抗体的构建以及苏丹红新型免疫检测技术的建立奠定基础。
- 石凌超韩红辉唐喆伟杜冰李恺王群钱旻
- 关键词：苏丹红I包涵体复性酶联免疫吸附测定
- 新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的构建表达与活性鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的原核表达载体,诱导表达后检测其生物活性。方法:PCR扩增绿脓杆菌外毒素APE40KDEL基因插入到pET32a(+),然后与合成的含有肠激酶酶切位点和肝癌特异性结合肽A54的核酸序列连接,构建重组表达载体pET32a(+)-A54-PE40KDEL,其经鉴定后转化E.coliBL21表达。超声破菌,上清液经Ni+亲和层析纯化,肠激酶酶切,再次Ni+离子亲和层析后得到免疫毒素A54-PE40KDEL。MTT和间接免疫荧光技术检测其对不同细胞株的细胞毒性及靶向性。结果:重组质粒序列正确,经Westernblot证实表达产物含Mr约58000的目的蛋白。A54-PE40KDEL能够与肝癌细胞特异性结合,且对肝癌细胞的毒性作用与对照相比有极显著性差异(P<0.01)。结论:成功构建了A54-PE40KDEL原核表达载体;获得的新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL在体外与肝癌细胞具有一定结合特异性及杀伤活性,为肝癌导向治疗提供了一条可行的途径。
- 虞丽平韩红辉石凌超杜冰张小平周忠良钱旻
- 关键词：免疫毒素肝癌绿脓杆菌外毒素A特异性结合肽
